199851. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubsztituált hidroxi-(heterociklusos-alkoxi-foszfinil-oxi)-trialkil-ammónium-hidroxid-oxidok belső sóinak és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 199851 B 2 mintákat 60 percig szobahőmérsékleten inkubáljuk, majd az enzimreakciót 100 (0.1 0,5 n nátronlúg hozzáadásával leállítjuk. Ezután Ti térték Multiskan berendezésben, 405 nm hullámhosszon megmérjük az abszorbanciát. A Meth A fibroszarkómában és az emberi neuroblasztómában jelenlévő daganatsejtek számát a 3H- timidin-felvétellel mérjük az alábbiak szerint: 72 óra elmúltával a sejteket alaposan kimossuk, és körülbelül 0,1 (tC 3H-timidinnel kezelünk minden egyes edényt. 4-6 óra elmúltával a sejteket egy kereskedelmi forgalomból beszerezhető sejtszedővel összegyűjtjük, és a szűrlet radioaktivitását szcintillációs számlálással mérjük. Az (I) általános képletű vegyületek daganatgátló hatását az ,£T- I8-OCH3 citotoxicitásra gyakorolt hatása” vizsgálattal is kimutathatjuk. Ezt a következőképpen végezzük: (BALB/CX57/BL6)F1 egerekből vett csontvelősejtmakrofágokat (105 üregenként) 10 (lg l-oktadecil-2- metoxi-3-foszforil- kolinnal (ET-I8-OCH3 anyaggal) laposfenekű mikrotitráló lemezeken (Nunc Roskilde, Dánia) 24 órán át inkubálunk, majd centrifugáljuk, és egyszer mossuk. Ezután a lemezekhez DMEM-ban + 10 % borjúmagzati szérumban Abelson 8.1 daganatsejteket és 1,3, illetve 5 (ig vizsgálandó vegyületet adunk. Az ET-I8-OCH3 (10 |ig) citotoxicitását önmagában 100 %-nak tekintve meghatározzuk a citotoxikus hatás gátlását vagy növekedését az alkálikus foszfatáz mérésével; az értékeket 72 óra után 1, 3 és 5 (lg vizsgálandó anyag esetében állapítjuk meg. Az (I) általános képletű vegyületeknek daganatok kezelésére való alkalmasságát az alábbi eljárással is igazolhatjuk. Old és munkatársai eljárásával [L. J. Old. és munkatársai: Ann. N.Y. Acad. Sei. 101, 80 (1962)] Meth A fibroszarkóma sejteket indukálunk BALB/C egerekben metil-kolantrén adagolásával. Ezeket a daganatsejteket a metil-kolantrén adagolása után 12 nappal a hasüregből összegyűtjtük. Ezután 10 darab 10—12 hetes CBFi egeret 7,3 x 106 Meth A szarkómasejttel oltunk be, s ezeket az állatokat kontrollként használjuk. CBFi egerekből álló másik csoportot szintén 7,3 x 106 Meth A szarkómasejttel oltunk, és a daganatsejtek beültetése után egy nappal minden egyes egeret orálisan naponta 5-50 |ig vizsgálandó vegyülettel kezelünk összesen 20 vagy 27 napig. A daganatok növekedését és a túlélő állatok számát a daganatsejtek oltása után 7, 14, 21 és 28 nappal állapítjuk meg. A fentiek alapján indokolt a találmány szerinti vegyületek daganatgátló szerekként való alkalmazása. E célra a javasolt napi dózis körülbelül 500-2000 mg, előnyösen 1000-1500 mg, amelyet célszerűen 125-2000 mg-os adagokra elosztva, előnyösen 250- 1500 mg-os adagokra elosztva, előnyösen 250-1500 mg-os adagokra elosztva napi 1—4 részletben, vagy késleltetett felszabadulást biztosító formában, vagy például 24 órás időszak alatt 20 mg/kg intravénás adagolásával biztosítunk. A tipikus orális adagolási forma 300-600 mg találmány szerinti vegyületet, az adagolási egység 300-500 mg, különösen 350-450 mg találmány szerinti hatóanyagot tartalmaz. A találmány értelmében tehát daganatokat is kezelhetünk, s ez a módszer abban áll, hogy egy kezelésre szoruló egyén számára egy (I) általános képletű vegyületet adagolunk. A találmány szerinti vegyületeket önmagukban vagy gyógyászati szempontból elfogadható hígítóvagy vivőanyaggal együtt - és adott esetben más töltőanyagokkal együtt - orálisan, például tabletták, diszpergálható porok, szemcsék, elixirek, kapszulák vagy szuszpenziók alakjában vagy parenterálisan, például steril, befecskendezhető oldatok vagy szuszpenziók alakjában adagolhatjuk. Az előállítás és az adagolás könnyedsége szempontjából a szilárd halmazállapotú készítmények, különösen a tabletták és a szilárd anyaggal vagy cseppfolyós termékkel töltött kapszulák az előnyös gyógyszerkészítmények. E gyógyszerkészítmények előállítása szintén a találmány tárgyát képezi. A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. A hőmérséklet- értékeket Celsius-fokokban adjuk meg. 1. példa 2-[Hidroxi-tetrahidro-2-(oktadecil-oxi-metil-5- -oxo-2-furil)-metoxi-foszfinil-oxi]-N,N,N-trimetil-etil-ammónium-hidroxid-4- oxid belső só előállítása [(Ib) alcsoport; c) gyűrű; R=CH20C|8H37; valamennyi Ri=CH3; n=2; m=l] a) lépés 1 -O-Oktadecil-3-O-benzil-glicerin előállítása 12,0 g (30 mmól) 60 %-os ásványolajos nátriumhidrid diszperziót petroléterrel olajmentesítünk, és 32,4 g (300 mmól) benzil- alkohol 200 ml száraz dimetil-formamiddal készült oldatához adjuk. A szuszpenziót nitrogénáramban 80 °C-ra melegítjük, 45 percig e hőmérsékleten tartjuk, majd 63,2 g (0,19 mól) olyan epoxidot adunk hozzá 100 ml dimetilformamidban oldva, amelyet allil-oktadecil-éter persavas oxidációjával állítottunk elő, s utána a reakcióelegy hőmérsékletét 15 órán át 80 °C-on tartjuk, majd az oldószert vákuumban lepároljuk, és a maradékot szilikagélen kromatografáljuk. Eluálószerként petroléter és dietil-éter 3:2 arányú elegyét alkalmazva kapjuk az a) lépés cím szerinti termékét alacsony olvadáspontú, viasszerű szilárd anyagként. b) lépés: l-(Oktadecil-oxi)-3-(benzil-oxi)-aceton előállítása-60 °C hőmérsékleten komplexet állítunk elő úgy, hogy 8,9 g (70 mmól) oxalil-klorid 150 ml dildórmetánnal készült oldatához 10,4 ml száraz dimetilszulfoxidot adunk. Ehhez a komlpexhez 27,0 g (62,2 mmól) a) lépésben készült terméket csepegtetünk, majd az elegyet nitrogén-atmoszférában 1 órán át keverjük, utána 50 ml trietil-amin és 50 ml diklórmetán elegyét adjuk hozzá, az elegyet 30 perc alatt 0 °C-ra hagyjuk felmelegedni, és 75 ml vízzel elbontjuk. A keveréket szobahőmérsékletre hagyjuk felmelegedni, a szerves fázist elválasztjuk, telített konyhasóoldattal mossuk, magnézium-szulfáton megszárítjuk, és vákuumban bepároljuk. Az így kapott olajszerű termék állás közben megszilárdul. Ezután szilikagélen „flash” kromatográfiát végzünk, eluálószerként petroléter és dietil-éter 7:3 arányú elegyét alkalmazzuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
