199820. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 5-anilino-1,2-ditiol-3-on-származékok és az ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 199820 B 2 és szárítjuk. 40,5 g 2-metil-(4-nitro-fenil)-propionitrilt kapunk, fehér por alakjában , amely 78 *C-on olvad. A 2-metil-2-fenil-propionitrilt L.B. Taranko és R.H. Perry, Jr. módszere szerint állíthatjuk elő [J. Org. Chem. 34, 226 (1969)]. 53. példa A 39. példában leírtakkal analóg módon eljárva, de 9 g 4,5- diklór-l,2-ditiol-3-onból és 7,3 g 2-(4- hidroxi-fenil)- acetamidból kiindulva, acetontrilből való átkristályosítás után 3,5 g 2-[4-(4-klór3-oxo-l,2- ditiol-5-il)-oxi-fenil]-acetamidot kapunk sárga por alakjában, amely 168 *C-on olvad. A 2-(4-hidroxi-fenil)-acetamidot H. Salkowski módszere szerint állíthatjuk elő [Chem. Bér., 22, 2137 (1889)]. Farmakológiai vizsgálatok A makrofágok aktiválásának mérése in vitro sejttenyésztésre szokásosan használt steril Petri csészékbe 2.10'6 serkentett egér-hashártya makrofágot helyezünk. A sejtek körülbelül két órás összetapadási szakasza után az összes nem tapadt sejteket izotóniás foszfát pufferrel kétszer mosva távolítjuk el, majd hozzáadunk 15 % borjúszérumot tartalmazó 2 ml Dulbecco közeget. Ezután hozzáadjuk a vizsgálandó vegyület - oldhatóságától függően - 100 ml vízzel vagy 5 ml dimetil-formamiddal vagy dimetil- szulfoxiddal készült oldatát oly módon, hogy az oldószer a reakcióelegy 0,25 %-át képezze. A mintát 37 °C-on 18 óra hosszat 10 % széndioxidot tartalmazó atmoszférában inkubáljuk. Izotóniásd foszfát pufferrel való mosás után az inkubációs közeget 2 ml, 15 % borjúszérumot tartalmazó Dulbecco közegben lévő 0,04 %-os zimozán szuszpenzióval helyettesítjük, majd az előbbeik szerint hozzáadjuk a vizsgálandó vegyületet. Végül hozzáadunk 100 ml etanolos oldatban lévő 0,05 %, 0,5 mCi aktivitású 14Ci-glükózt, és 30 percig 37 °C-on 10 % széndioxidot tartalmazó légkörben hagyjuk a fagocitózist lejátszódni. A pentóz-foszfátok hatására az aktiválás alatti glükózfogyasztást a közegben 14C02 felszabadulás kíséri. A közegben oldódott I4CC>2-t kihajtjuk és felfogjuk, hogy a radioaktivitást szcintillációs számlálóval méijük. A vizsgálandó vegyületek minden egyes adagját 5-5 Petri csészében vizsgáljuk és azonos körülmények között, de vegyületet nem tartalmazó tenyészetekkel hasonlítjuk össze. A makrofágok aktiválásának a pentózok révén létrejövő százalékos gátlását a következő képlettel számítjuk ki: Xdpm - Tdpm • 100 I % = 100--------------------------------Zdpm - Tdpm I % = százalékos gátlás dpm = percenkénti bomlás X = a vizsgált vegyület adott koncentrációjú mintáinak átlaga T = a vegyület nélküli minták átlaga Z = csak zimozánnal kezelt minták átlaga Akut toxicitás egereken vizsgálva A vegyületeknek azt a koncentrációját határozzuk meg, amely egereknek perorálisan beadva, 50 %-os pusztulást okoz (LD50). Az eredményeket a következő táblázat szemlélteti. Példa száma LD50 Toxicitás (egér) %-os (mg/kg/p.o.) Makrofágok aktiválása gátlás a megadott koncentrációban 1--63% 5 x 10-6 M 2 atox. 900-78% 5 x 10"6 M 3 atox. 900-50% 4 x Kf6 M 4 atox. 900- 14% 5 x 10"6 M 5 atox. 900-50% 2x10-6M 6 atox. 900-100% 5 x 10-6 M 8 atox. 900-50% 5 x 10"6 M 9 atox. 900-65% io-5m 10 atox. 900-45% 2,5 x ÍO^M 11--76% 5 x IO-6 M 12 >1000-50% 2 x ÍO^M 13 atox. 900-52% 2,5 x 10-6 M 15 atox. 900-50% 1,25 x 10"6 M 16 300 - 900-68% 2,5 x IO"6 M 17 atox. 900-55% 5 x 10-6 M 18 atox. 900-50% 2 x 10-6 M 20 >900-75% io-5m 21 >900-37% 5 x 10"6 M 22 300 - 900-50% 6,5 x IO"6 M 23 300-900-58% io-5m 25 1200-50% 7,5 x IO*6 M 26 >900-50% 5 x 10"6 M 27 atox. 300-40% 5 x 10-6 M 28 300-900-50% 2,5 x 10-6 M 29 atox. 900-29% 5 x IO*6 M 30 300-900-49% 10"5 M 31 300-900-31 % io-5m 32 atox. 900-50% 5 x IO-6 M 33 atox. 900-97% io-5m 34 atox. 900-45% 5 x 10-6 M 35 atox. 900-55 % 5 x 10-6 M 36 atox. 900-80% io-5m 37 atox. 900-77% io-5m 38 atox. 900-92% io-5m 39 atox. 900-72% io-5m 40 atox. 900-84% io-5m 41 atox. 900-22% 5 x 10"6 M 42 atox. 900-50% 2 x IO"6 M 43 atox. 900-50% 7,5 x 10-6 M 44 atox. 900-50% io-6m 45 atox. 900-20% 5 x 10-6 M 46 atox. 900-75% 105 M 47 atox. 900-58% io-5m 48 >900-50% 5x IO'6 M 49 atox. 900-57% io-5m 50 atox. 900-60% 10-5M 51 atox. 900-65% io-5m 52 >900-67% 5 x Kk6 M 53 atox. 900-50% 3 x 10-6 M A találmány keretébe tartozik az (I) általános képletű vegyületeket szabad formában vagy adott esetben savaddíciós sóik alakjában tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítása, amelyek a hatóanyagon kívül gyógyszerészetileg elfogadható, közömbös vagy fiziológiailag hatásos segédanyagot tartalmaznak. A találmány szerinti gyógyszerkészítmények perorálisan, parenterálisan, rektálisan vagy helyileg alkalmazhatók. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 14
