199819. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új kumarin-származékok és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 199819 B 2 körben megadottal - Friedel-Crafts-reakciónak vetünk alá egy a tárgyi körben adott meghatározásnak megfelelő Rí csoport bevitelére; és kívánt esetben (i) egy a fenti eljárások bármelyike szerint kapott, R2 helyén hidrogénatomot tartalmazó (I) általános képletű vegyületet - ahol Ri, R3, R4, Rö és R7 jelentése egyezik a tárgyi körben megadottal - az R2 szubsztituens tárgyi körben adott, hidrogénatomtól eltérő jelentésének megfelelő szubsztituens bevitelére alkalmas alkilező szerrel való reagáltatás útján a megfelelő R2 szubsztituenst tartalmazó (I) általános képletű vegyületté alakítunk át, és/vagy (ii) egy a fenti eljárások bármelyike szerint kapott (I) általános képletű vegyületet annak valamely gyógyászati szempontból elfogadható sójává alakítunk át. A találmány szerinti eljárással előállítható (I) általános képletű vegyületek és sóik a vérlemezkék aggregációját gátló hatással rendelkeznek. így például e vegyületek in vitro 10 y/ml és 1000 y/ml közötti koncentrációban képesek e hatásukat kifejteni, amint ezt az alább ismertetett kísérletek mutatják. A) kísérlet A vérlemezkék aaggregációjának értékelésére egy "ELVI 840” aggregométert alkalmaztunk Bőm módszere [Nature 194, 927 (1962)] szerint. "New Zeland" fajtájú nyulakat 140 mg/kg kloralóz és 500 mg/kg uretán (karbaminsav-etilészter) keverékével anesztetizálunk, majd a nyaki verderbe kanült vezetünk be és 40 ml vért veszünk ki, amelyhez azonnal hozzáadunk 3,8 % nátrium-citrátot. Centrifugálással két külön műveletben (1000 illetőleg 6000 fordulattal percenként) két frakciót, fehérjében dús plazmát (PRP) és fehérjében szegény plazmát (PPP) különítünk el; az előbbit az utóbbival hígítjuk oly módon, hogy 300 000 vérlemezke/mm3 koncentrációjú plazmát kapjunk (a vérlemezke-számlálást Buerker-féle készülékkel végezzük). Ehhez adjuk azután a kívánt koncentrációkban a találmány szerinti, vérlemezke-aggregációt gátló hatásúvegyületeket és az elegyet aggregálószer hozzáadásával 30 percig inkubáljuk 37 °C hőmérsékleten. Vérlemezke-aggregálószerként ADP-t (adenozin-difoszfátot) alkalmazunk 20 pg/ml koncentrációban. A kapott eredményeket az alábbi I. táblázatban foglaltuk össze; a PRP plazmához 20 pg/ml hozzáadott ADP áltla okozott vérlemezke-hiperaggregációnak a 100 y/ml mennyiségben alkalmazott vegyületek általi gátlását a kontrolihoz viszonyított %-ban fejeztük ki; a táblázatban az egyes vegyületeket sorszámokkal (a táblázat első oszlopában) és az illető vegyület előállítását a jelen leírásban ismertető példa sorszámának (a második oszlopban) megadásával jellelmezzük, míg a harmadik oszlop a kapott %-os gátlás értékeket mutatja. I. táblázat Vérlemezke-aggregáció gátló hatás Vegyület 100 y/ml hatóanyag gátló hatása %-ban 19. (1. példa) 40 25. (2. példa) 19 26. (3. plda) 23 Vegyület 100 y/ml hatóanyag gátló hatása %-ban 27. (4. példa) 32 28. (5. példa) 54 29. (6. példa) 19 44. (7. példa) 20 49. (8. példa) 25 50. (9. példa) 25 51. (10. példa) 37 52. (11. példa) 22 58. (17. példa) 25 62. (18.példa) 23 67. (19. példa) 18 68. (20. példa) 41 69. (21. példa) 29 76. (22. példa) 27 102. (23. példa) 12 105. (24. példa) 28 117. (12. példa) 44 121. (13. példa) 51 124. (14. példa) 38 130. (26. példa) 29 132. (26. példa) 9 132. (25. példa) 13 188. (27. példa) 19 200. (15. példa) 21 201. (16. példa) 32 A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületek közül egyesek, például a 4-metil-6-(dimetil-amino- metil)-7-hidroxi-8-allil-kumarin és sói, például a hidroklorid (19. sz. vegyület), valamint a 4-metil-6-{[4-(2-hidroxi-etil)- -1-piperazinil]-metil}-7-hidroxi-8-allil-kumarin és sói, például a dihidroklorid (26. sz. vegyület) tumorellenes és metasztázis-gátló hatással is rendelkeznek, amint ezt egéren in vivo végzett farmakológiai kísérletek bizonyítják. Az említett vegyületek ilyen aktivitása 0,2 mg/kg illetőleg 10 mg/kg orális adagok beadásával mutathatók ki, az alábbi példa szerint: B) kísérlet C57B1/6J törzsű hím egerek (egyenkénti testsúly 20-22 g körül) lábába intramuszkuláris injekcióval 1.105 3LL karcinoma-sejtet Lewia tüdőkarcinoma) implantálunk. Ezt a műveletet az irodalomban [A. Poggi és munkatársai: Cancer Res. 37, 272-277 (1977)] leírt módon végezzük. Az implantáció után 25 napig figyeljük a tumor növekedését A 25. napon az állatokat, a primer tumort és a tüdőt kivesszük, a primer tumor növekedésének és a képződött metasztázisok számának értélése céljából. Az állatok orális úton történő farmakológiai kezelése a tumor implantálása előttt két nappal kezdődik és az állat leöléséig folytatódik. A kísérlethez alkalmazott vegyületeket vízvezetéki vízben oldjuk és az oldatot 24 óránként cseréljük. Egy külön kísérletben értékeltük az alkalmazott vegyületek koaguláció-gátló aktivitását, ugyanilyen törzsű egereken és az antimesztatikus hatás értékelésére alkalmazottal azonos adagolásban. Az antikoagulációs hatás az Owren-féle tromboteszt-módszerrel [P. A. Owren és munkatársai: Lancet 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
