199786. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a magas vérnyomás kezelésére használható peptid-származékok előállítására
1 HU 199786 B 2 gyed órán át 37 ”C hómérsékleten tartottuk. A reakciót ezután 1 ml 0,1 mólos sósav-oldat hozzáadásával befagyasztottuk, majd az elegyhez 1 mi etil-acetátot adtunk. Ezt követően forgó rendszerű keverőn kevertük, majd rövid ideig centrifugálva a fázisokat elválasztottuk. Az etil-acetátos oldat egy 500 pl térfogatú részletét beleöntöttük egy folyadék-szcintillációs küvettába, amely 10 ml Riafluor-t (a New England Nuclear Corporation, Boston, Massachusetts védjegyzett terméke) tartalmazott. Az I50- értékek meghatározása céljából összehasonlítottuk az enzim aktivitását, amelyet az inhibitor különböző mennyiségeinek jelenlétében mértünk az enzimnek az inhibitor nélkül végzett kísérletekben mért aktivitásával. A százalékos gátlásnak az inhibitor koncentrációja függvényében való grafikus ábrázolása útján meghatároztuk az Iso-értéket A fentiek szerint előállított vegyületek in vitro inhibitor aktivitását a 34. példában leírt meghatározási módszerrel mérjük. Az enzim-készítményt emberi vizeletből különítjük el és tisztítjuk J. W. Ryan és munkatársai módszere szerint [Tissue and Cell, 10, 555 (1978)]. Egyes vegyületek Iso-értékét az alábbi táblázatban mutatjuk be. Az 150-érték az inhibitornak azon koncentrációja, amely az enzimet 50 százalékban gátolja egy olyan standard meghatározási rendszerben, amelyben a szubsztrát koncentrációja lényegében a Michaelis-állandónál alacsonyabb érték. A kísérletben az 5. sz. vegyület 1,6.10' 8 mól IDso-értéket mutatott 35. példa Na-[3-(Na-benzoil-DL-fenil-alanil-tio)-2-D-metil-propanoil]-L-prolin-nátriumsó farmakológiai hatása orális adagolás mellett 150-190 g testsúlyú patkányokat 1 éjszakán át koplaltattunk, majd 50-60 mg/kg pentobarbitál intraperitoneális adagolásával érzéstelenítettünk. Az állatokon légcsőmetszést hajtottunk végre, és mechanikus úton lélegeztettük. Az angiotenzin I adagolására a comb vénájába kanült vezettünk be, az artériás vérnyomás közvetlen mérésére pedig egy második kanült helyeztünk el a nyaki verőérben. A koaguláció gátlására a comb vénájába 1000 egység heparint adagoltunk. A vérnyomást transzduktor segítségével írószerkezeten keresztül regisztráltuk. A patkányoknak 400 ng/kg angiotenzin I-et adagoltunk 20 pl 0,9 százalékos nátrium-klorid- oldatban oldva. Ez a dózis az artériás vérnyomást 45 Hgmm-mel emelte. Miután megállapítottuk a patkány angiotenzin I adagolására adott reakcióját, 10 pmól/kg fenti vegyületet adagoltunk gyomorszondán keresztül. A vegyületet 0,15 ml víz és 10 pl 1 n nátrium-hidrogén-karbonát-oldat elegyében oldottuk. A 400 ng/kg angiotenzin I hatását az artériás vérnyomásra időközönként megállapítottuk. Az eredményeket az alábbiakban adjuk meg: Orális adagolás utáni idő, perc Vérnyomás-változás 400 ng/kg angiotenzin 1 hatására (a kontroll százalékában)-5 100 (45 Hgmm) +5 82 10 33 Orális adagolás utáni idő, perc Vérnyomás-változás 400 ng/kg angiotenzin I hatására (a kontroll százalékában) 15 24 20 27 30 27 40 22 50 24 60 27 90 36 120 44 150 62 180 60 210 71 240 73 százalék. 36. példa Na-{3-(Na-Benzoil-DL-fenil-alanil-tio)-2-D-metil-propánod]-L-prolin-káliumsó intravánás hatása A fenti vegyület intravénás hatását az előző példában megadott kísérle! t szerint vizsgáltuk, azzal a különbséggel, hogy intravénásán 1 pmól/kg vegyületet adagoltunk. A kapott eredményeket az alábbi táblázat szemlélteti: Orális adagolás utáni Vérnyomás-változás 400 ng/kg idő, perc angiotenzin I hatására (a kontroli százalékában)-5 100 (54 Hgmm) +5 46 10 37 15 41 20 37 30 44 40 50 50 39 60 46 90 52 * 120 59 százalék. 37. példa Az előzőekben leút eljárásokkal állítottuk elő az alább felsorolt vegyüléteket, melyeket fizikai állandókkal és biológiai hatással (I50) jellemeztünk. A vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatokban az alábbi oldószerrendszereket használtuk (a futtatást szilikagél lemezeken végeztük): Rf (1):L rendszer metanol-kloroform (1:1 tf/tf) Rf (2):2. rendszer: benzol-víz-n-butanol (9:1:9) Rf (3):3. rendszer ecetsav-víz-n-butanol (26:24:150) Rf (4):4. rendszer: n-butanol-piridin-ecetsav-víz (15:10:3:12) Rf (5):5. rendszer: n-butanol-ecetsav-etil-acetát-víz (1:1:1:1) Rf (6):6. rendszer: kloroform-metanol-ecetsav (2:1:0,003) Rf (7):7. rendszer: n-butanol-ecetsav-víz (4:1:1) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 31
