199786. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a magas vérnyomás kezelésére használható peptid-származékok előállítására

1

HU 199786 B

2

Vegyü- Vékonyréteg-kromatográfia : Rf NMR - spektrum

let R A 12345678 60Mhz (delta)

jele

13.

H

Phe

0,52

0,51

14. CpCO-Lys Phe

0,16

0,52

0,58

15.

<Glu

Phe

0,43

0,63

0,48

0,75

16.

CpCO

Phe

0,48

0,73

0,62

0,72

17.

EtCO

Try

18.

Bz

Try

19. Bz-Phe-2-tiopro-panoil-L-Pro

0,58 0,78 0,59 0,59

(2H, m, CH2), 3,98 (2H, d, CH2), 4,4-4,7 (1H, m, CH) és 8,68 (1H, s, COOH)

(CD3OD) : 1,02 (3H, t, CH3), 1,08 (3H, széles d, CH3), 1,8-2,5 (4H, m, CH2), 2,20 (2H, q, CH2),

2,5-3,1 (3H, m, CH és CH2), 3,1-3,9 (4H, m, CH2),4,1-4,5 (1H, m, CH), 4,7-5,0 (1H, m, CH) és 6,95-7,8 (5H, m, aromás H)

(CD3OD) :1,10 (3H, széles d, CH3), 1,65- 2,3 (4H, m, CH2), 2,6-3,1 (3H, m, CH és CH2), 3,2-3,7 (4H, m, CH2), 4,05-4,35 (1H, m, CH), 4,8-5,1 (1H, m, CH) és 6,88-7,82 (10H, m, aromás H)

31. példa 25

Na-[3-(Na-benzoil-DL-fenil-alanil-tio)-2-D-metil-propanoil]-L-prolin-nátriumsó

234,3 mg (0,5 mmól) N«-[3-(N«-benzoil-DL-fenil-alanil -tio)-2-D-metil-propanoil]-L-prolin 1 ml vízmentes etanollal készített oldatához keverés közben 30 0,5 mmól nátrium-hidrogén- karbonátot adunk (1 mólos oldatként). Az oldószert 35 °C hőmérsékleten forgó bepárlóban lepároljuk. Az olajos maradékhoz friss etanolt adunk, és az oldószert forgó bepárlón ismét eltávolítjuk. Ezt az eljárást még egyszer abszolút 35 alkohollal, majd kétszer benzollal elvégezzük. A fehér maradékot vákuum exszikkátorban foszfor-pentoxid felett szárítjuk. 95 százalékos etanol és benzol elegyéből történő átkristályosítás után 135 mg (55,1 százalék) fehér, kristályos anyagot kapunk, melynek 40 olvadáspontja: 185-186 °C.

(150 *C-on lágyul.)

IR-analízis (KBr): 1398 és 1600 cm'1 (ikerion), és 1682 cm'1 (tioészter).

Szilikagél lemezen végzett vékonyréteg-kromatog- 45 ráfiás vizsgálat (3 különböző oldószer-rendszerrel), valamint pH = 2 és pH = 5 értéken végzett papírelektroforézis vizsgálat egyetlen foltot mutatott. (Detektálás: rövid hullámú UV-fény, előhívás: fenazinmetoszulfáttal). 50

Elemanalízis a C25H27N2SNa0s.2H20 képlet alapján:

számított: C: 57,02, H: 5,93, N: 5,32, S: 6,09;

talált: C: 56,37, H: 5,59, N: 5,30, S: 5,99.

55

32. példa

Na-[3-(Na-benzoil-DL-fenil-alanil-tio)-2-D-metil-propanoil] -L-prolin-káliumsó

A cím szerinti káliumsót az 1. példában leírtak szerint állítjuk elő, 1 mólos nátrium-hidrogén-karbo- 60 nát-oldat helyett 1 mólos kálium-hidrogén-karbonátoldatot használva. Átkristályosítás után 70 mg szilárd, fehér anyagot kapunk, melynek bomláspontja: 132-33. példa

Na-[3-(Na-benzoil-DL-fenil-alanil-tio)-2-D-metilpropanoil]-L-prolin L-lizin sója

73,1 mg (0,5 mmól) L-lizin szabad bázis 0,3 ml ionmentesített vízzel készített oldatát csepegtetjük keverés közben 234,3 mg (0,5 mmól) Na-[3-(Nabenzoil-DL-fenil-alanil-tio)-2- D-metil-propanoil]-L- prolin 1 ml abszolút etanollal készített oldatához. Az oldószert forgó bepárlóban eltávolítva fehér maradékot kapunk. Ehhez újra abszolút etanolt adunk, és az oldószert ismét forgó bepárlóban eltávolítjuk. Ezt az eljárást még kétszer abszolút etanollal és kétszer benzollal megismételjük. Vákuum exszikkátorban foszfor-pentoxid felett történő szárítás után 0,292 g terméket kapunk, melynek bomláspontja: 152-154 °C. Abszolút etanol, néhány csepp víz és benzol elegyéből történő átkristályosítás után 141 mg fehér csapadékot kapunk, melynek bomláspontja: 162,5-163,5 °C (lágyuláspont: 160 °C).

IR-analízis: (KBr): 1389 és 1620 cm'1 (ikerion), 1641 cm'1 (karbonil és amid), 1678 cm'1 (tioészter).

34. példa

Az angiotenzint átalakító enzim aktivitásának meghatározása

A jelen leírásban ismertetett kísérletek többségében az enzim aktivitását pH = 8,0-nál, 0,1 mól nátriumkloridot és 0,75 mól nátrium-szulfátot tartalmazó, 0,05 mólos Hepespuffer-oldatban határoztuk meg. Szubsztrátként benzoil-Gly-His-Leu-t használtunk, amelynek végső koncentrációja 1,10'4 mól volt (Km = 2.10"4 mól), körülbelül 130.000 cpm aktivitású [3H]benzoil-Gly-His-Leu-val (25 Ci/mmól) keverve. Az enzim- oldatot olyan mértékben hígítottuk az említett puffer-oldattal, hogy 40 pl pufferolt enzimoldat 37 °C hőmérsékleten, negyedóra alatt a szubsztrát 13 százalékát hidrolizálja el. A meghatározást úgy végeztük, hogy először 40 pl enzim-oldatot és 10 pl puffer- oldatot, vagy a puffer-oldatban feloldott inhibitort 5 percig 37 “C-on tartottunk, Ezután hozzáadtunk 50 pl szubsztrát-oldatot, és az elegyet ne30