199562. lajstromszámú szabadalom • Javított eljárás glükóz izomerizálására
HU 199562 B Avenue, Washington, D.C. 20036) határoztuk meg. Az F-14-gyel kapott színérték százszorosa adja a CIRFX100 értéket. 2. Példa Ez a példa egy finomított kukoricakeményítő-hidrolizátumból és kristályos glükózból álló oldat magas hőmérsékleten végzett közvetlen izomerizálását mutatja be, melynek célja a szárazanyagra számítva 55,2 t% fruktózt tartalmazó készítmény előállítása. Kétfázisú eljárással dolgozunk, úgy, hogy az izomeri;álás .második fázisában kémiailag stabilizált glükózt alkalmazunk, mely glükóz-izomeráznak és polietilén-iminnek glutáraldehides kezeléssel oldhatatlanná tett komplexéből áll. A stabilizált izomeráz előállítása Oldható glükóz-izomerázt készítünk az 1. példában leírt módon. A tisztított izomerázt szobahőmérsékleten annyi 1 mM mangán-kloríd-oldatban oldjuk, hogy milliméterenként 9 mg izomerázt tartalmazó oldatot kapjunk, majd a keveréket a szűrési segédanyag eltávolítása céljából leszűrjük. Az enzim oldatának 300 ml-éhez 60 ml 10 tömeg/térf.%-os PEI-6-ot (polietilén-imin, mólsúlya 66, pH =8, a Dow Chemical Co. terméke) és 3 g xilitolt adunk, majd az oldatot 15 percen át keverjük. Az oldhatatlanná tett enzimet leszűrjük, vízzel mossuk és egy éjszakán át 37°C-os légcirkulációs szárítószekrényben szárítjuk. Szárítás után 12,8 g kötött izomerázt kapunk, melynek aktivitása 775 IdlU/ /g. A kötött enzimből 12 g-ot szuszpendálunk a tápoldatban, ezt vákuummal 60 perc alatt légtelenítjük szobahőmérsékleten, majd felhasználjuk egy 1,5 cm átmérőjű magas hőmérsékletű reaktor elkészítéséhez. 2. g; 19 A tápoldatot a kétfázisú izomerizálás első fázisú reaktorában készítjük el az 1. példában leírt módon. A tápoldat összetétele itt 20 a következő: 5 összes szárazanyag (t%) 42,6 Glükóz (t%, a szárazanyagra) 46,4 Fruktóz (t%, a szárazanyagra) 51,3 10 Poliszacharid (t%, a szárazanyagra) 2,3 Pszikóz (t%, a szárazanyagra) 0,0 Nátrium-hidrogénig szulfát (mM) 0,0 Magnézium-szulfát (mM) 50,0 Kobalt-klorid (mM) 0,1 pH 6,75 20 A tápoldatot 60°C-on, körülbelül 5 mi/ /perc sebességgel 45 percig keringetjük a reaktorban. Ezután az oszlop hőmérsékletét 101,6°C-ra emeljük, az áramlási sebességet pedig 2 ml/percre csökkentjük. A szubsztrát 25 felforrásának megakadályozására 8,4* 104 Pa túlnyomást alkalmazunk. Az oszlopból elvezetett folyadékot regisztráló polariméterrel figyeljük, mely 50 és 58 t% közötti fruktóztartalomra van beállítva. Az elvezetett fo- 3Q lyadéknak azt a részét, melyben a fruktóztartalom meghaladja az 55 t%-ot, jégfürdőben összegyűjtjük, pH-ját 1,0 mólos citromsavoldattal 4,0-ra állítjuk be. A magas hőmérsékletű és az első fázisú reaktorból elvezetett oldatokat, valamint az eredeti, glükóztartalmú oldatot szénhidrát-összetétel és szín szempontjából elemezzük. Az eredmények az alábbi 2. táblázatban láthatók: Az elBŐ és második fázisú izomerizálásfeal kapott oldatok Ssszetétele Szénhidrát-összetétel Szín , tPfflegg hamumentes szárazanyagra számítva/ /CIRP Az-oldat kezelése Fruklóz Glükóz Pszikóz Poliszacharid X100/ Izomerizálatlan 0 97,6 0 2,4 0,5 70 °C-on izomerizált 51,3 46,4 0 2,3 0,7 101,6 °C-on izomerizált 55,2 42,1 0 2,7 51,7 11
