199559. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A 10255 antibiotikum komplex és faktorai, valamint ezeket tartalmazó készítmények előállítására
HU 199559 B juk be. A beoltott táptalajt 7—10 riapon keresztül 30°C hőmérsékleten inkubáljuk. A kinőtt tenyészetre borjúszérumot adunk, és steril eszközzel lekaparjuk a spórát és a micéliumot. A nyert szuszpenziót kis csövekbe visszük át, és fagyasztva szárítjuk, eltartásra. A liofilizált pelletel oltjuk be a széles szájú, 250 milliliteres Erlenmeyer lombikban levő 50 ml alábbi összetételű táptalajt. 59 glükóz 15,0 g dextrin 20,0 g szójadara lO’Og kukoricalekvár 10,0 g élesztőkivonat 1,0 g kalcium-karbonát 2,0 g csapvízzel kiegészítjük 1 literre. A táptalaj kémhatását nátrium-hidroxid vizes oldatával pH=6’7 értékre állítjuk be. A táptalajt autoklávban sterilizáljuk, ami alatt a kémhatása pH=6,8^7,0 értékre változik. A beoltott vegetatív táptalajt 48 órán keresztül 30°C hőmérsékleten inkubáljuk 5 cm ^kitérésű, körkörös rázógépen percenként 250 fordulatszám mellett. A kapott vegetatív tenyészettel vagy kisebb fermentorokat oltunk be (1% inokulumot használva), vagy nagyobb térfogatú inokulum elkészítéséhez használjuk a második lépcső beoltásához. 2 literes, széles szájú Erlenmeyer lombikokba 400—400 ml alábbi összetételű táptalajt adunk: glükóz 15,0 g dextrin 20,0 g szójadara 15,0g kukoricakeményítő 10,0g élesztőkivonat 1,0 g kálcium-karbonát 5,0 g csapvízzel kiegészítjük 1 literre. Az Erlenmeyer lombikokat 2,5% fenti vegetatív oltóanyaggal oltjuk be. A beoltott táptalajt 30°C hőmérsékleten inkubáljuk 23 órán keresztül percenként 250 fordulatszámú körkörös rázógépen. 800 ml fenti tenyészettel oltunk be 115 liter alábbi összetételű táptalajt: alkotórész mennyiség (g/1) habzásgátló (Sag 471, Silicone antifoaming agent, Dow Corning Co.) 0,200 propilénglikol (MS 2000) 2,000 ml glükóz 1,000 kazein 16,000 nátrium-dihidrogén-foszfát-víz 0,100 melasz 40,000 kálcium-karbonát 5,000 csapvizzel kiegészítjük 110 literre. A táptalajt 165 literes fermentorba öntjük. A táptalaj kémhatását 5n nátrium-hidroxiddal pH=6,9 értékre állítjuk be. A táptalajt 45 percen át sterilezzük 0,13—0,14 MPa nyomáson 121°C hőmérsékleten. A sterilizálás után a táptalaj kémhatása pH=6,8. A beoltott tenyészetet steril levegővel levegőztetjük, induláskor percenként a tenyészet térfogatának felével azonos térfogatú levegőt vezetve át rajta. A kevertetés szokásos keverőberendezéssel végezzük percenként 300-as fordulatszámnál. A fermentálást 7 napon keresztül végezzük 30°C hőmérsékleten. Az oldott oxigén koncentrációját a levegőtelítettségi érték 45%-án tartjuk. Naponként és literenként 3,5—4,0 g glükózt adunk a tenyészethez. 24 óra elteltével naponként és literenként 3 g savhidrolizált kazeint (Hy Case Amino, Humko Sheffield Chemical Co., Lyndhurst, NJ, USA) is adunk a fermentorhoz. A nyers A10255 komplexet a 13. példában leírtak szerint nyerjük ki (lásd aláb). 12. példa Az A10255.2 törzset nagy térfogatban az alábbiak szerint fermentáljuk. Kétlépéses eljárással elkészítjük oltóanyagként az A 10255.2 törzs vegetatív tenyészetét. Mindkét lépésnél az alábbi összetételű táptalajt használjuk: glükóz 1,5% szójadara 1,5% burgonyadextrin 2,0% kukoricalekvár 1,0% élesztőkivonat 0,1% kálcium-karbonát 0,2% csapvíz kellő térfogatra. Az első lépésnél 80 ml táptalajt teszünk 250 milliliteres lombikba és sterilezés után fagyasztva szárított A10255.2 tenyészettel beoltjuk. A beoltott táptalajt 30°C hőmérsékleten inkubáljuk 48 órán keresztül körkörös rázógépen, percenként 250 fordulatszámnál. 10 ml fenti tenyészettel oltunk be 400 ml steril táptalajt egy kettőliteres, széles szájú Erlenmeyer lombikban. Ezt a tenyészetet 30°C hőmérsékleten inkubáljuk 24 órán keresztül körkörös rázógépen, percenként 250 fordulatszám mellett. Ezt a tenyészetet használjuk fel az alábbi táptalaj beoltására egy 150 60 literes fermentorban: cerelose 1,5% burgonyadextrin 2,0% kukoricalekvár 1,0% szójadara 1,5% kálcium-karbonát 0,5% SAG 471 habzásgátló (Dow Corning Co.) 0,01% csapvízzel kiegészítve 120 literre. A táptalajt autoklávozással sterilizáljuk. Sterilizálás után a kémhatását 5n nátrium-hidroxiddal pH= 6,5 értékre állítjuk be. A beoltott táptalajt 30°C hőmérsékleten inkubáljuk 24 órán keresztül. Fermentálás alatt steril levegővel levegőztetjük a tenyészetet, percenként 0,028 m3 levegőt átvezetve. A tenyészetet szokásos keverőberendezéssel kevertetjük percenként 350 fordulatszám mellett. A fenti tenyészet 40 literével oltjuk be az alábbi, nagyméretű fermentációs táptalajt: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 31
