199559. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A 10255 antibiotikum komplex és faktorai, valamint ezeket tartalmazó készítmények előállítására
HU 199559 B SAG 471 habzásgátló (szilikon habzásgátló) 0,02% propilénglikol (MS 2000) 0,02% melasz 4,00% kalcium-karbonát 0,50% kazein savhidrolizátum (Hy Case, Humko Sheffield Chemical Co., Lyndhurst, NJ., USA) 1,60% nátrium-dihidrogén-foszfát-víz 0,01 % glukóz 0,1% csapvizzel feltöltve 5450 literrel 61 (1200 gallon). A fenti táptalaj egy 7270 literes (1600 gallon) fermentorban van. A táptalaj kémhatását 5n nátrium-hidroxiddal pH=7,0 értékre állítjuk be, majd 30 percen át sterilezzük 121°C hőmérsékleten és 0,13 MPa nyomáson. A sterilezett, beoltott táptalajt steril levegővel levegőztetjük kezdetben percenként 0,56 m3 (20 köbláb) levegőt áthajtva. A kevertetést szokásos keverőberendezéssel végezzük kezdetben percenként 100 fordulatszám mellett. A fermentációt 6 napon át végezzük 30°C hőmérsékleten. A fermentáció alatt a tenyészet kémhatását pH=7,0 értéken tartjuk. A táptalaj oldott oxigén koncentrációját a levegőtelítettség 45%-át kitevő értéken tartjuk. Naponként és literenként 4 g glükózt adunk a táptalajhoz. 24 óra elteltével naponként és literenként 3 g Hy Case savhidrolizált kazeint is adunk a tenyészethez. 13. példa Az A10255 komplex kinyeréséhez 5000 liter Al0255.2 törzs fermentlevet szürőadalékanyag mellett (Hyflo Super-Cel, Johns Manville Products Corp.) leszűrünk. A szűrletet és a biomassza 1200 liter mosóvizét elöntjük. A biomasszát egy adagban extraháljuk 2000 liter víz/aceton, 1:4 összetételű elegyével. Az extrahálást megismételjük, és az extraktumokat egyesítjük (4000 liter össztérfogat). Az egyesített extraktum tartalmazza a termelt A10255 komplex nagy részét. Az egyesített extraktumot csökkentett nyomáson vizes oldatig pároljuk. Állás közben finom szilárd anyag válik ki a szuszpenzióból. Ez a nyers A10255 komplex. A betöményített extraktumot centrifugáljuk, a felülúszót eldobjuk. A centrifugálással kapott szilárd anyagot csökkentett nyomáson szárítjuk, 1,5 kg barna port nyerve, melynek A10255 antibiotikum aktivitása 423 pg/mg. A komplexet a 3—9. példákban leírtak szerint választjuk szét az egyes komponenseket. A kapott faktorok fizikai állandói megegyeznek a leírásban megadottakkal. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az A10255 komplex és a B, C, E, F, G és H faktorának bármilyen kombinációban való előállítására,azzal jellemezve, hogy 32 a Streptomyces gardneri NRRL 15537, Streptomyces gardneri NRRL 18260, Streptomyces gardneri NRRL 15922 törzset vagy ezek bármelyikének A10255 antibiotikumot termelő mutánsát asszimilálható szénforrást, nitrogénforrást és szervetlen sókat tartalmazó táptalajon, süllyesztett, aerob fermentációs körülmények között tenyésztjük, majd kívánt esetben az A10255 komplexet a fermentléből elválasztjuk, és kívánt esetben egy vagy több faktort az A10255 B, C, E, F, G és H faktorok közül elkülönítünk az A10255 komplexből. (Elsőbbsége: 1987.12.14.) 2. Eljárás az A10255 komplex és a B, C, E, és F faktorának bármilyen kombinációban való előállítására, azzal jellemezve, hogy Streptomyces gardneri NRRL 15537, Streptomyces gardneri NRRL 15922 törzset vagy ezek bármelyikének A10255 antibiotikumot termelő mutánsát asszimilálható szénforrást, nitrogénforrást és szervetlen sókat tartalmazó táptalajon, süllyesztett, aerob fermentációs körülmények között tenyésztjük, majd adott esetben az A10255 komplexet a fermentléből elválasztjuk; és adott esetben egy vagy több faktort az A10255 B, C, E és F faktorok közül elkülönítünk az A10255 komplexből. (Elsőbbsége: 1986.12.15.) 3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy Streptomyces gardner NRRL 15537 törzset vagy annak A10255 antibiotikumot termelő mutánsát tenyésztjük. (Elsőbbsége: 1986.12.15.) 4. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy Streptomyces gardneri NRRL 15922 törzset vagy annak A10255 antibiotikumot termelő mutánsát tenyésztjük. (Elsőbbsége: 1986.12.15.) 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy Streptomyces gardneri NRRL 18260 törzset vagy annak A10255 antibiotikumot termelő mutánsát tenyésztjük. (Elsőbbsége: 1987.12.14.) 6. A 2—5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás az A10255B faktor előállítására, azzal jellemezve, hogy a keletkezett A10255 komplexből a B faktort választjuk el. (Elsőbbsége: 1986.12.15.) 7. Az 1—5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, az A10255G faktor előállítására, azzal jellemezve, hogy a keletkezett A10255 komplexből a G faktort választjuk el. (Elsőbbsége: 1987.12.14.) 8. Eljárás tápanyaghasznosítást növelő tápkészítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az állati eleséget az 1—7. igénypontok bármelyike szerint előállított A10255 komplexet vagy A10255 B, C, E, F, G vagy H faktort vagy ezek bármilyen kombinációját keverünk. (Elsőbbsége: 1987.12.15.) 9. Eljárás állatok tápanyaghasznosítását fokozó készítmény előállítására, azzal jelle-62 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
