199508. lajstromszámú szabadalom • Eljárás GRF peptidek és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 199508 B A találmány szerinti eljárással előállított peptidek fragmensei is rendelkeznek biológiai potenciállal, és általában elmondható, hogy a peptidnek legalább az N-terminális csoporttól az (I) általános képlet R27 csoportjáig kell terjednie. A 27-es helyzetben lévő Met helyén a felsorolt szubsztituensek egyikét viselő hGRF analógok lényegesen nagyobb stabilitással rendelkeznek, különösen oxidáció esetén. Amennyiben a szubsztituens egy D-izomer, a vegyület enzimekkel szemben való ellenállóképessége is megnő. Ezek a vegyületek teljes mértékben biológiailag aktívak maradnak, és in vitro vizsgálva bizonyos analógok meglepően nagy aktivitással rendelkeznek. Ha az 1-es helyzetben lévő His csoportot más csoporttal helyettesítjük, meglepően nagy biológiai aktivitású vegyületet kapunk. Amenynyiben a hGRF-ben a 10-es helyen lévő aminosavcsoportot egy D-konfigurációjű aminosavcsoporttal helyettesítjük, például D-Tyr-nal, a kapott anyag aktivitása nem csökken lényegesen, és a peptid bizonyos enzimek hasító hatásával szemben ellenállóvá válik. À peptideket a peptidkémiában ismeretes módszerekkel, például szilárd fázisú technológiákkal, állítjuk elő. Szilárd fázisú szintézisre utat mutat a „Solid-Phase Peptide Synthesis" (Stewart, Young, Freeman and Co., San Francisco, 1969)'t. könyv, valamint például a 4 105 603 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, továbbá Merrifield közleménye (J. Am. Chem. Soc., 85, /1969/, 2149). A peptidek kémiai szintézise esetén a különböző aminosav részek labilis oldaliáncait a peptidkémiában ismert eljárások szerint megfelelő védőcsoporttal blokkoljuk, majd a reakció végén ezeket eltávolítjuk. Általában az aminosav vagy fragmens a-amino-csoportjára is védőcsoportot viszünk fel, mielőtt az aminosav vagy fragmens karboxilcsoportját reagáltatjuk, majd az a-amino-csoport védőcsoportját szelektíven eltávolítjuk, hogy lehetőséget teremtsünk ezeken, az ezt követő reakciók lejátszódására. Ennek megfelelően egy olyan intermediert állítunk elő, amely az összes aminosav-részt a megfelelő szekvenciában tartalmazza, és a peptid oldalláncaiban a megfelelő részekhez védőcsoportok kapcsolódnak. A fentiek alapján a találmány szerinti eljárással az (I) általános képletnek megfelelően peptideket úgy állítjuk elő, hogy legalább egy, a peptidkémiában önmagában ismert védőcsoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületről, amelynek C-terminális vége adott esetben á peptidkémiában önmagában ismert gyantához kapcsolódik a gyantát és/vagy a védőcsoportot vagy védőcsoportokat lehasítjuk. Az ismert védőcsoportok például a következők lehetnek: — a-amino-védőcsoportok, így például a következők: 3 1) aromás uretán-típusú védőcsoportok, mint például a fluorenil-metoxi-karbonil-(FMOC), benzil-oxi-karbonil-(Z) és szubsztituált benzil-oxi-karbonil-csoport, mint például a p-klór-benzil-oxi-karbonil-, p-nitro-benzil-oxi-karbonil-, p-bróm-benzil-oxi-karbonil-csoport, vagy 2) alifás uretán védőcsoportok, mint például a terc-butoxi-karbonil-(BOC), diizopropil-metoxi-karbonil-, izopropoxi-karbonil-, etoxi-karbonil-, alliloxi-karbonil-csoport, vagy 3) cikloalkil-uretán-típusú védőcsoportok, mint például a ciklopentiloxi-karbonil-, adamantiloxi-karbonil- és ciklohexiloxi-karbonil-csoport — His imidazol nitrogénatomját védő védőcsoport, például Tos-csoport, — Tyr fenolos hidroxil-csoportját védő csoport, például tetrahidropiranil-, terc-butil-, tritil-, Bzl, CBZ, 4-Br-CBZ és 2,6-diklór-benzil-csoport (DCB), — Asp vagy Glu karboxilcsoportja számára megfelelő észterképző csoport, például benzil-(OBzl), 2,6-diklór-benzil-, metil- és etilcsoport, — Thr vagy Ser hidroxilcsoportja számára alkalmas védőcsoport, például acetil-, benzoil-, terc-butil-, tritil-, tetrahidropiranil-Bzl, 2,6-diklór-benzil- és CBZ, — Asn vagy Gin amido-oldalláncának blokkolására alkalmas védőcsoport, előnyösen xantilcsoport (Xan), — Arg csoport guanidinocsoportjához megfelelő védőcsoport, például nitro-, tozil-, CBZ, adamantil-oxi-karbonil-, terc-butoxi-karbonil-csoport, — Lys oldallánc aminocsoportjának blokkolására alkalmas védőcsoport, például a 2- -klór-benzil-oxi-karbonil-(2Cl-Z), tozil-, t-amiloxi-karbonil vagy terc-butoxi-karbonil(BOC) csoport. Az oldallánc aminocsoportok védőcsoportjainak a megválasztása nem kritikus, és általában olyant választunk, amelyek az a-amino-csoportok védőcsoportjainak az eltávolítása során a szintézis közben nem hasadnak le. Néhány aminosavcsoportot, például a His-t általában nem szükséges védeni a kapcsolás befejezése után, és a védőcsoportok ugyanazok lehetnek, mint az a-amino-csoportok védőcsoportjai. Szilárd gyanta hordozóként az irodalomból jól ismert bármely ismert hordozót alkalmazhatunk, például -0-CH2- gyanta hordozót, -NH-benzhidril-amin (BHA)-hordozót vagy -NH-parametil-benzhidril-amin (MBHA) -gyanta hordozót. Az egyes oldallánc védőcsoportok kiválasztása során a következő szabályokat követjük: a) a védőcsoportnak meg kell tartania védő tulajdonságait, és a kapcsolás körülményei között nem hasadhat le. b) a védőcsoportnak a reagenssel szemben stabilnak kell lennie, és Xan kivételével az a-amino-védőcsoportok lehasítására alkal-4 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 05
