199498. lajstromszámú szabadalom • Eljárás netilmicin előállítására
HU 199498* B (a leírás bevezető részében (A)-val jelölve). A reakciót a [D] reakcióvázlat szemlélteti. Mielőtt az (V) képletű vegyület védőcsoportjait hidrolízissel eltávolítanánk, elegendő nátrium-hidroxidot adunk kezdetben hozzá, hogy a nátrium-bórhidridet dezaktiváljuk, majd az oldószert eltávolítjuk a reakciókeverékből. Ezt azonnal el kell végezni, amint a reakció befejeződött. A védőcsoportok eltávolítása hidrolízissel szokásos eljárás. Azt tapasztaltuk, hogy ha egy bázist, előnyösen 10%-os nátrium-hidroxidot adunk a vegyülethez, és a hidrolízises reakciót nitrogénatmoszférában, visszafolyatással végezzük 10—20 óráig, akkor kielégítő eredményt kapunk. A reakció lefolyását vékonyréteg-kromatográfiával ellenőrizhetjük. Az így kapott hidrolizátumot 6 pH-értékre savanyítjuk, és a netilmicint körülbelül 85—90% hozammal izoláljuk. A találmány szerinti eljárás kiviteli módját közelebbről a példák szemléltetik. 1. példa Triszililezett-tri-N-acetil-szizomicin a) 500 ml-es háromnyakú gömblombikba, amely felső, mechanikus keverővei, visszafolyató hűtővel (szárítócsővel ellátva) és hőmérővel van felszerelve, 15,0 g (26,2 mmól, nagyteljesítményű folyadékkromatográfiával 83% tisztaságú) 3,2’,6’-tri-N-acetil-szizomicint, 0,750 g (1,12 mmól) 3,2’,6’-tri-N-acetil-szizomicin-szulfátot, 150 ml 1,2-dimetoxi-etánt és 25 ml (118,5 mmól) hexametil-diszilazánt készítünk. A reakcióelegyet olajfürdőben (az olajfűrdő hőmérséklete 105°C) 5 órán át visszafolyatással melegítjük és a szililezés előrehaladását ’H-MMR-spektrummal ellenőrizzük. A szililezési reakció az 5,2” és 4” helyeken körülbelül 3—8 óra alatt végbemegy. Szililezett-l-N-etil-3,2’,6’-tri-N-acetil-szizomicln b) Az a) rész szerinti vízmentes reakciókeverékhez szobahőmérsékleten 150 ml metilén-dikloridot adunk. A keveréket körülbelül 15°C-ra lehűtjük és 3,0 ml (53,6 mmól) hideg acetaldehidet adunk hozzá. A reakcióelegyet 30 percig keverjük, majd hozzáadunk 1,9 g (50,2 mmól) porított nátrium-bór-hidridet, visszamelegítjük szobahőmérsékletre és 10— 15 percig keverjük, amíg a feleslegben lévő acetaldehidet tökéletesen elimináltuk. Ezután csepegtető tölcsérből gyorsan csepegtetve 30 ml 0,5 M vizes borátpuffert (pH=9,75) adunk a keverékhez és szobahőmérsékleten 2 órán át keverve az imint a megfelelő etil-amino-szubsztituenssé redukáljuk. Netilmicin A b) rész szerinti reakciókeverékhez a nátrium-bór-hidrid dezaktiválása céljából 4 5 30 ml 10%-os vizes nátrium-hidroxid-oldatot adunk. A dimetoxi-etán/metilén-diklorid oldószerkeveréket csökkentett nyomáson eltávolítjuk. A maradékhoz 200 ml 10%-os vizes nátrium-hidroxid-oldatot adunk, és a keveréket olajfürdőben (103°C), gyenge nitrogénáramban 20 órán át visszafolyatással melegítjük. A reakció lefolyását vékonyréteg-kromatográfiával ellenőrizzük, kifejlesztő oldószerként kloroform:metanol-tömény ammónium-hidroxid 1:1:1 arányú keverékének alsó fázisát használva. A hidrolizátumot jégfűrdőben lehűtjük, 25%-os vizes kénsavat használva 6 pH-értékre megsavanyítjuk, és a csapadékot kiszűrjük. A szűrlet egy alikvot részét a nagyteljesítményű folyadék-kromatográfiás vizsgálathoz megfelelő koncentrációra hígítjuk. A korrigált nagyteljesítményű folyadék-kromatográfiás kitermelés a netilmicinre 88%. 6 2. példa 2”,5-piszilil-3,2’,6’-tri-N-acetil-szizomicin 4,0 g (6,04 mmól, nagyteljesítményű folyadék-kromatográfiával 86,6% tisztaságú) 3,2’,6’-tri-N-acetil-szizomicin és 0,04 g (0,06 mmól) 3,2’,6’-tri-N-acetil-szizomicin - -szulfát 40 ml 1,2-dimetoxi-etánnal készített szuszpenziójához keverés közben 4,4 ml hexametil-diszilazánt adunk, és az elegyet olajfürdőben 3 órán át visszafolyatással melegítjük. A reakciókeverék tiszta homogén oldattá alakul, ezen a ponton a melegítést megszüntetjük (a ’H-MMR-spektrum azt mutatja, hogy a keverék főrésze 2”,5-diszililezett-tri-N-acetil-szizomicin). Az iminképzést, a redukciót és a hidrolízist az 1. példában leírtak szerint végezzük. A korrigált nagyteljesítményű folyadék-kromatográfiás kitermelés a netilmicinre 83%. 3. példa Netilmicin előállítására 3,2,6’,3”-tetra-N-acetil-szizomicinből Az ehhez a kísérlethez használt tisztított 3,2’,6\3”-tetra-N-acetil-szizomicint úgy állítottuk elő, hogy a 3,2’,6’-tri-N-acetil-szizomicin 3”-aminocsoportját N-acetil - imidazollal acetileztük és kovasavgél oszlopon izoláltuk. 4 g liofilizált tetra-N-acetil-szizomicint 40 ml 1,2-dimetoxi-etánban szuszpendálunk és 4,4 ml hexametil-diszilazánt adunk hozzá. A keveréket 7 órán át visszafolyatással forraljuk. A ’H-MMR-spektrum azt mutatja, hogy a szililezési reakció végbement. Az iminképzést, redukciót és hidrolízist az 1. példában leírtakhoz hasonlóan végezzük. A korrigált nagyteljesítményű folyadék-kromatográfiás kitermelés a netilmicinre 83,5%. / 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
