199494. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új szacharidok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 199494 B Az (I) általános képletű vegyületek tumorok ellen is hatásosak, amint azt az alábbi kísérletek bizonyítják. 1. Tumor nekrózis faktor (TNF) indukció Abból a célból, hogy egerek csontvelő makrofágjait stimuláljuk, körülbelül 10—13 napos, CSF-ral (colony stimulating faktor) indukált BDF, egerek csontvelősejtjeit táptalajban (RPMI+1% Pen/Strep (5000 egység/ml)-fl% glutamin) 1X10® sejt/ml-re hígítjuk és lapos mikrotitráló lemezeken inkubáljuk a kísérleti anyagokkal oldatban, 100 pg-0,1 pg/ml végső koncentrációban (hígítási műveletek 1:10) 4 órán át 37°C-on/5% C02. A felüluszót 0,45 pm-es szűrőn megszűrjük és —70°C-on fagyasztva tartjuk, amig a TNF teszthez szükség lesz rá. L 929 sejteket előtenyésztünk éjszakán át (37°C 5% C02) mikrotitráló lemezeken, 3X102 * 4 sejt/üreg/100 pl koncentrációban, majd minden egyes minta 100 pl-ét hozzáadjuk és tenyészeteket 1:2 arányban tovább hígítjuk. Ezután hozzáadunk 100 pl aktinomicin D-t (8 pg/ml táptalaj) és tovább inkubáljuk 18 órán át 37°C-on/5% C02” A felüluszókat eltávolítjuk, a visszamaradó sejtek felületét Giemsa-oldattal megfestjük, és az abszorpciót 620 nm-en mérjük (Titertek Multiscan Autoreader, flow). A TNF egysége az az aktivitás, amely a szóbanforgó L 929 sejtek 50%-os lizisét eredményezi. 2. B16F1 melanoma teszt B16F1 melanomasejteket 5 napig in vitro tenyésztünk. A sejteket szintkronizáljuk egy nappal azelőtt, hogy a kísérletet elvégezzük, úgy, hogy EDTA-tripszin alkalmazásával az egysejtréteget különálló sejtekre bontjuk, és az egészet visszatesszük ugyanabba a palacki ba friss táptalajjal. A sejteket megszámoljuk és beállítjuk 106 sejt/ml táptalaj koncentrációra. A sejtszuszpenzió 0,1 ml-ét ( 105 sejt) intravénásán beadjuk az egerek farkvénájába. 21 nap múlva az egereket leöljük és a tüdőtumorokat megszámoljuk. A kísérlethez B6D2F| egereket használunk. A kísérleti vegyületeket feloldva a —6: —4. és —1. napon intraperitoneális injekcióban adjuk be. Azt találtuk, hogy az (I) általános képletű vegyületek immunprofilaktikus aktivitással rendelkeznek, a B16F1 egerek melanóma-áttételei a tüdőben csökkennek. A terápiás hatás egy további ellenőrzéseképpen az egereket a 3., 6., 8., 10., 13. és 15. napon kezeljük a tumorsejtek beoltása után. így is megfigyelhető az áttételek képződésének jelentős csökkenése. Az (I) általános képletű vegyületek ezért javalltak, mint nem-specifikus mikróbaellenes rezisztencia modulátorok, továbbá az immunválasz szisztémás fokozására, és a nem-specifikus immunitás növelésére. Az (I) általános képletű vegyületek így javalltak csökkent immunválasszal kapcsolatos állapotok kezelésére vagy kisegítő kezelésére (vagyis más 6 9 specifikus vagy kisegítő terápiás formákkal együtt), így elsősorban a csökkent humorális (testnedvi) immunválasz és/vagy az elhúzódó típusú csökkent túlérzékenységi reakció és olyan állapotok kezelésére, amelyeknél általában javailt az immunválasz modulálása. Az (I) általános képletű vegyületek elsősorban javalltak olyan káros állapotok kezelésére vagy kisegítő kezelésére, amelyek elsődleges immunológiai defektusokon vagy olyan immunológiai fogyatékosságokon alapszanak, amely típusok idős pacienseknél vagy súlyos égésekben vagy általános fertőzésekben szenvedő betegeknél észlelhetők. Az (I) általános képletű vegyületek javalltak továbbá virusbetegségek (így disszeminált herpesz, súlyosbodó himlő- és disszeminált bárányhimlő betegségek) Hodkin-kór és más rosszindulatú tumorok kezelésére vagy kisegítő kezelésére. Az (I) általános képletű végyületek javalltak továbbá például baleseteknél elforduló endotoxin-sokk megelőzésére, égéseknél és sebészeti beavatkozásoknál és mint gyulladásgátló szerek. A javasolt napi dózis vagy egyetlen alkalmazás adjuváns hatás elérésére, például kisegítő kezelésnél körülbelül 0,1—70 mg, célszerűen például parenterálisan, előnyösen i.p. beadva napi dózis esetében, osztott dózisokban 2—4-szer naponta egységdózis formájában, amely a bekevert hatóanyagból körülbelül 0,025—35 mg-ot tartalmaz, vagy a hatóanyagot késleltetett formában tartalmazza. Egy javasolt teljes egyetlen adjuváns dózis legfeljebb 70 mg hatóanyagot tartalmaz. Immunmoduláló hatásukat tekintve az (I) általános képletű vegyületek javalltak adjuvánsokként alkalmazva vakcinákban is. Erre a felhasználásra a javasolt dózis körülbelül 0. 5—100 mg, előnyösen kb. 70 mg, beadva a vakcinálás napján, és megfelelő ismétléssel ugyanebben a dózisban 2—4 héttel ezután. Az (I) általános képletű vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények a szokásos galenusi eljárásokkal előállíthatok, például a szokásos, gyógyszerészetileg elfogadható hígítókkal vagy hordozókkal végzett keveréssel. A készítmények előállíthatok például injektálható oldatok alkjában. Ezeknek előállítása ugyancsak a találmány oltalmi körébe tartozik. A találmány tárgyát képezi továbbá az (I) általános képletű vegyületek alkalmazása gyógyszerek elsősorban immunmodulátorok, vírusok elleni szerek és gyulladásgátló szerek hatóanyagaként. A találmány szerinti eljárás kiviteli módját a példák szemléltetik. A példákban előforduló rövidítések: EDTA etiléndiamin-tetraecetsav, DTE 1,4-ditioeritrit, UDP uridinfoszfát és trisz trisz(hidroxi-metil)-amino-metán. 1. példa 6-0- [2-Dezoxi-3-0- [ ( R)-3-hidroxí-tetradeka-10 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
