199461. lajstromszámú szabadalom • Eljárás oktahidro-indolizin és -pirido(1,2-a)pirimidin-propánsav-származékok előállítására
HU 199461 B karbonsavhalogenidet a faktorral reagáltatjuk savmegkötő reagens, például piridin jelenlétében. Az acilezést alkalmas poláris szerves oldószerben vagy víz/szerves oldószer keverékekben hajtjuk végre. Alkalmas oldószer például az acetonitril, tetrahidrofurán, aceton, metil-etil-keton, dimetil-acetamid, dimetil-formamid és más szokásos oldószerek, amelyek nem reagálnak az acilező vagy szulfonilező reagenssel. Az A-faktor és B-faktor O-acil-származékain ((4) általános képlet) hidrogéngázzal, Pt katalizátor felett hidrogenolízis hajtható végre és dezoxi-A-íaktor (le), illetve dezoxi-B-faktor (lf) képződik. A hidrogenolízist előnyösen előredukált platina-oxid felett hajtjuk végre körülbelül In sósavoldatban, 20— 45°C között, előnyösen szobahőmérsékleten. Elég mintegy 105—2.105 Pa hidrogénnyomást alkalmaznunk. A katalizátort általában az acilezett vagy szulfonilezett A- vagy B-faktor súlyával azonos mennyiségben alkalmazzuk a reakcióban. A (4) általános képletű A- vagy B-faktorszármazék hidrogenolízise előnyös módszer a dezoxi-A-faktor és a dezoxi-B-faktor előállítására. Az A-faktor acilszármazékának hidrogenolízisekor kisebb mennyiségű tetrahidrodezoxi-A-faktor is képződik, kevés A-faktorral együtt. Az A-faktor valószínűleg a kiindulási származék hidrolízise útján képződik. Az A-faktort, a dezoxi-A-faktort és a tetrahidrodezoxi-A-faktort fordított fázisú C,8 szilikagél HPLC-vel választjuk szét. A (4) általános képletű vegyületek hasznos közbenső termékek az ACE-bénítók, a dezoxi-A-faktor és á dezoxi-E-faktor előállításához. Ezenfelül a (4) általános képletű vegyületek, melyekben R4 2—5 szénatomos alkanoil-oxi-csoportot jelent, szintén hatásos ACE-bénítók. Különösen előnyös acilszármazék az O-acetil-A-faktor, amely ACE-gátló aktivitást mutat ugyanazokban a próbákban, melyekben az A-faktór és az A- és B-faktor (1) általános képletű redukciós termékei aktivitást mutatnak. Ennek megfelelően a (4) általános képletű O-acilszármazékok magas vérnyomás kezelésére alkalmas hasznos vérnyomáscsökkentő szerek. A találmány szerinti ACE-bénítók előállításához kiindulási anyagként használható A58365 A-faktort és B-faktort ((3) általános képlet) a Streptomyces chromofuscus NRRL 15098 egy új törzsének tenyésztése útján állítjuk elő, benyújtott szabadalmi leírásaink szerint (X-5950, X-5972 vagy X-5972M jegyzékszámot). A (3) áltálános képletű vegyületek, ahol n=l, az A58365 A-faktor, míg a 3 általános képletű vegyületek, ahol n*=2, az A58365 B-faktor elnevezést kapták. A (3) általános képletű vegyületekek Streptomyces chromofuscus NRRL 15098 tenyésztésével állítjuk elő, asszimilálható szén- szervetlen só és nitrogénforrást tartalmazó vizes tápközeget használva aerób fermentációs körülmé7 nyék között. A fermentációhoz tápközegként bármely ismert táptalajt alkalmazhatunk, mivel a mikroorganizmus különféle táptalajforrásokból képes energiát hasznosítani. így például a mikroorganizmus szénigényének kielégítéséhez a táptalajhoz különböző szénhidrátokat adhatunk, beleértve cukrokat és keményítőket. Hasonlóképpen a táptalajban különféle nitrogénforrásokat alkalmazhatunk, így aminosavakat, szeszlepárlásnál kapott kivonatokat, hús-peptonokat, és kazein-hidrolizátumokat. Az ACE-faktorok termelésének gazdaságossága, optimális kinyerése és könynyű izolálhatósága érdekében előnyben részesítünk bizonyos tápközegeket. Például előnyös szénforrás a burgonya-dextrin, jóllehet különböző cukrok, mint glükóz vagy fruktóz szintén használhatók. Előnyös nitrogénforrások a peptonok és kazein-hidrolizátumok. A mikroorganizmusok fermentálásánál általában szervetlen tápsókat adunk a táptalajhoz az ACE-faktorol^ termelésének elősegítése céljából. E szervetlen sók nátrium-, kálium-, ammonium-, kalcium-, foszfát-, klorid-, karbonát- és hasonló ionokat szolgáltató szokványos sók. Nyomelemek is adhatók a táptalajhoz, bár ezek általában elegendő mennyiségben állnak rendelkezésre a tápközeghez adott adalékok alkotórészeiként. Az S. chromofuscus NRRL 15098 fermentálása során az A58365 faktorok képződésének előmozdítása céljából kobaltiont vagy más kétértékű kationt adunk a fermentációs közeghez. Előnyös kobaltforrás a kobalt-diklorid. A kétértékű kationt, mint a kobaltiont kis mennyiségben alkalmazzuk; így a tápközeghez mintegy 5—15 mg CoCl2.6H20-t adunk Az A58365 A-faktor S. chromosfuscus általi termelése nagy mértékben fokozódik, ha a fermentációs közeghez prolint adunk. Általában a fermentléhez literenként elegendő mintegy 1—6 g prolint adni. Ha prolinon kívül a táptalajt lizinnel — előnyösen L-lizinnel — is kiegészítjük, fokozott mértékben képződik az A58365 B-faktor és ilyenkor ez lesz a legbőségesebben képződő faktor. A B-faktor előállításakor a táptalajt literenként előnyösen mintegy 1—6 g prolinnal és mintegy 1—3 g lizinnel egészítjük ki. A fermentálást körülbelül 23—30°C között hajtjuk végre. A legjobb eredményeket mégis 25°C-on végzett fermentálás esetén kapjuk. A fermentáció folyamán a közeg pH-ja nő. Általában a fermentlé pH-ját kezdetben mintegy 7-re állítjuk be, és a végső pH körülbelül 8—8,3. A fermentálást aerób körülmények között hajtjuk végre, miközben keverés mellett steril levegőt vezetünk át a fermentációs közegen. A legjobb eredmények érdekében a fermentációs közeghez az oldott oxigén szintjét megközelítőleg 30—40% levegő-telítéssel tartjuk fenn. A túlzott habzás megakadályozása céljából általában habzásgátló anyagot haszná-8 5 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
