199412. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fluorozott arachidonsav-származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 199412 B kány (basophilie leukémia) sejtekből nyert szupernatánsban lévő 5-lipoxigenáz enzimmel szemben. Az enzim extraktum előállítását és az enzimaktivitás mérését a Prostaglandins (1988) 36. számában leírtak szerint végeztük. Szubsztrátként az 5(Z); 8(Z)-eikozadiénsavat alkalmaztuk a szokásos szubsztrát, azaz az arachidonsav helyett. Az enzimgátlás vizsgálatát a következőképpen végeztük: az enzimet (~1,2 mg protein/ml; 10X106 sejt/ml) tartalmazó reak-7 cióelegyet 25°C-on 1 percig előinkubáltuk, ezután a szubsztrát beadagolással (~10 pM) megindítottuk a reakciót a vizsgált vegyülettel együtt vagy anélkül, majd 9 perc .múl- 5 va a terméket, vagyis az 5-lipoxigenáz által átalakított 5,8-eikozadiénsavat, nevezetesen az 5-hidroperoxi- és 5-hidroxi-6,8-eikozadiénsavat extraháljuk és nagynyomású folyadék-kromatográfiás vizsgálattal (HPLC) anali- 10 záltuk. 8 Példa Vegyület Lipoxigenáz gátlás (%) Koncentráció (^uM) 1 5 10 30 50 100 Arachidonsav 12 22 41 1 5-Fluor-5,8,14- eikozatriénsav 16 34 53 5-Fluor-arachidonsav 60 78 84 Arachidonsav 3 10 2 5-Fluor-arachidonsav 59 64 6-Fluor-arachidonsav 64 67 3 5-Fluor-arachidonsav 0 56 86 BW-755-c 42 81 94 Az 1., 2. és 3. példánál a szubsztrát koncentráció 11, 10, és 10 p,M, a termék menynyisége pedig az inhibitor nélküli kontroliokban 1000, 630, illetve 1120 ppm/9 perc/vizsgálat volt. A találmány szerinti eljárással előállított fluorozott arachidonsav-származékók hatásos mennyisége igen széles tartományon belül változhat az alkalmazott dózisegységtől, a kezelés időtartamától, a kezelendő beteg életkorától és nemétől, valamint a betegség súlyosságától függően. A beadott hatóanyag összes mennyisége általában körülbelül lmg/ /kg és 150 mg/kg, előnyösén 3 mg/kg és 25 mg/kg között lehet. Például, egy átlagosan 70 kg-os emberi betegnek körülbelül 70 mg — körülbelül 10 g közötti hatóanyagra van szüksége naponta. Egy egységdózis 25—500 mg hatóanyagot tartalmazhat, amelyet egyszer vagy többször adhatunk be naponta. Az (I) általános képletű hatóanyagot gyógyászatiig alkalmazható hordozóanyaggal keverve, közönséges egységdózis formákban kiszerelve orálisan, parenterálisan vagy helyileg egyaránt alkalmazhatjuk. Előnyös az orális beadási mód. Orális beadás a vegyületeket szilárd vagy folyékony készítmény formában, így kapszula, pirula, 4g tabletta, pasztilla, szögletes pasztilla, ömledék, por, oldat, szuszpenzió vagy emulzió formában szereljük ki. A szilárd egységdózis forma lehet kemény vagy lágy zselatinkapszula, amely a hatóanyag mellett pl. felület- 50 aktív anyagokat, kenőanyagokat és inert töltőanyagokat, így laktózt, szacharózt, kalcium-foszfátot és keményítőt is tartalmazhat. A találmány szerinti eljárással előállított hatóanyagokat közönséges tabletta alapanyagok- 55 kai, így laktózzal, szacharózzal és keményítővel, valamint töltőanyagokkal, így akácmézgával, keményítővel vagy zselatinnal; szétesést elősegítő szerekkel, így burgonyakeményítővel, alginsavval, kukoricakeményítő- 0Q vei és guarmézgával; kenőanyagokkal, így például talkummal, stearinsavval, vagy magnézium-, kalcium-, cink-stearáttal; festékekkel, szfnezőszerekkel, ízesítőszerekkel keverve tablettává sajtolhatjuk. A folyékony orális dózisformák esetén meg- 65 felelő adalékanyagok; hígítószerként víz és 5
