199303. lajstromszámú szabadalom • 99m-Tc-mal jelezhető in vivo diagnosztikus készlet az agy regionális vérátfolyásának mérésére és a vér alakos elemeinek jelzésére és eljárás d,l-4,8-diaza-3,6,6,9-tetrametil-undekán-2,10-dion-bisz-oxim és 99m-Tc-mal jelzett formájának előállítására
5 HU 199303 A 6 oldunk 200 ml vízmentes alkoholban, hozzáadunk 20 g finoman elporított nátrium-karbonátot, és -20* C-ra lehűtve hozzácsepegtetjük 48,4 g (0,4 mól) 3-klór-2-butanon-oxim 200 ml vízmentes alkohollal készített oldatát. Az elegyet hűtés közben 2 órán át keverjük, majd szó- 5 bahőmérsékletre hagyjuk melegedni, végül 12 órán át enyhe forrásban tartjuk. Az elegyet szűrjük, az alkoholt lepároljuk, és a maradék olajat acetonitrilben feloldva kristályosodni hagyjuk. 22 g (40%) terméket kapunk d,l és mező izomerek 1 : 1 arányú keveréke formájában; op.: 122-124 *C. c) d,l- és mezo-HM PAO elkülönítése: A b) lépés szerint kapott 22 g nyers terméket acetonitrilből 7-9-szer átkristályosítjuk. A tiszta mezo-izomert finom, színtelen tűk formájában kapjuk. Hozam: 15 7,5 g,op.: 150-51 ‘C. Elemzés a Ci3HaN402 képlet alapján: számított: C: 57,32%, H: 10,36%, N: 20,56%; talált: C: 56,98%, H: 10,48%, N: 20,26%. Az átkristályosítási anyalúgokat egyesítjük és bepároljuk. A maradékot sok acetonitrilben feloldva szobahőmérsékleten kristályosodni hagyjuk. A kivált kristályokat (főtömegében mezo-izomer) kiszűrjük, és az anyalúgot bepároljuk. A bepárlási maradékot etil-acetátból 5-6-szor átkristályosítjuk. A tiszta d,l-izomert 10 nagy, színtelen lemezek formájában kapjuk. Hozam: 5 g, op.: 129-130 *C. Elemzés a C^H^N^ képlet alapján: számított: C: 57,32%, H: 10,36%, N: 20,56%; talált: 0.57,15%, H: 10,58%, N: 20,42%. A mező- és d,l-HM-PAO arányának változása az egyes átkristályosítások után a következő volt: 1. táblázat Átkristályosítások száma Álkristályosítószer Anyagmennyiség összesen, g mczo-HM-PAO tartalom, % 0. (kiindulási érték) — 22,0 50,0 1. acetonitril 10,0 12,0 2. etil-acetát 9,2 8,2 3. etil-aeetát 8,5 6,0 4. etil-acetát 7,1 3,1 5. etil-acetát 6,2 1,3 6. etil-acetát 5,0 0,4 A kapott d,l-HM-PAO azonosítási adatai a következők: Infravörös spektrum jellemző sávjai (KBr pasztilla): 3300,2400,1460,167 cm“1. NMR spektrum jellemző vonalai (DMSO-d«, 250 MHz): 1,07 (6H, d, CHMe), 0,78 (6H, s, CMe^, 1,50 (2H, b, NH), 1,65 (6H, s, CNMe), 2,12 (4H, m, CH2N), 3,14 (2H, q, CH), 10,24 (2H, s), OH) ppm. Rf = 0,4 (szilikagél-G rétegen metanollal futtatva, jódgőzzel előhívva). 2. példa Diagnosztikus készletek A következő összetételű diagnosztikus készleteket állítjuk elő: A) d,l-HM-PAO 0,30 mg ón(II)-klorid-dihidrát 0,0038 mg nátrium-pirofoszfát-dekahidrát 2,52 mg (pH: 9,0-9,8) B) dJ-HM-PAO 0,30 mg őn(II)-klorid-dihidrát 0,0076 mg nátrium-pirofoszfát-dekahidrát 2,52 mg (pH: 9,0-9,8) C) d,l-HM-PAO 0,30 mg ón(II)-klorid-dihidrát 0,0019 mg nátrium-pirofoszfát-dekahidrát 2,52 mg (pH: 9,0-9,8) D) d,l-HM-PAO 0,30 mg 6n(II)-klorid-dihidrát 0,0038 mg nátrium-pirofoszfát-dekahidrát 42,52 mg 3. példa 99m-Tc-HM-PAO komplexek előállítása A 2. példa A), B), C), illetve D) pontjában megadott mennyiségű d,l-HM-PAO-t vízmentes, nitrogéngázzal telített etanolban oldjuk, és nitrogén atmoszférában elegyítjük a megfelelő mennyiségű ón(II)-klorid és nátrium-pirofoszfát-dekahidrát nitrogénnel telített vizes oldatával. Az így kapott elegyekhez 99Mo-99m-Tc generátorból számlázó 99m-pertcchnclál cluátumot adunk 35 (aktivitás: 370-1110 MBq/5,0 ml). A kapott termékek radiokémiái tisztaságát az inkubációs idő függvényében radiokromatográfiás módszerekkel vizsgáljuk (2,5 cm x 20 cm méretű Gelman ITLC/SG lemez, MEK; 2,5 cm x 20 cm méretű Gelman ITLC/SG lemez, 0,9 tömeg/tér- 40 fogat %-os vizes nátrium-klórid oldat; 2,5 cm x 30 cm méretű Whatman No. 1 papír, 1 : 1 térfogatarányú acetonitril/víz elegy). Az így kapott termékekben a lipoidoldható 99m-Tc-d,l-HM-PAO komplex %-os menynyiségét az inkubációs idő függvényében a 2. táblázat- 45 ban közöljük. 4. példa Minősítő és ellenőrző vizsgálatok A 2. példa A) pontjában közölt összetételű diagnosz- 50 tikus készletből a 3. példában leírtak szerint előállított, 99m-Tc-d,l-HM-PAO komplexet tartalmazó diagnosztikai reagenst a következő minősítő és ellenőrző vizsgálatoknak vetettük alá: a) HPLC analízis: 55 A HPLC analízist BIO-BARD RP-318 oszlopon két BIO-RAD 1330 pumpával, gradiens kromatográfiás rendszerrel végeztük. Az eluens radioaktivitását NaI szcintillációs detektorral mértük, amelyhez egy számlálót csatlakoztattunk. 60 A számláló jelét kiírón és X-Y írón rögzítettük. Az eluens a kromatográfia kezdetén 0,02 M NaH2P04 + 2% metanolt tartalmazó puffer volt 20 pl minta injektálása után fél perccel acetonitrilt adtunk a rendszerhez lineáris gradiens programmal úgy, hogy az acetonitril térfo- 65 gatszázaléka 75%-ra emelkedett 5 percen belül. 4,5 4
