199152. lajstromszámú szabadalom • Eljárás foszfonát- és foszfonamid-endopeptidáz-inhibitorok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
199152 sziiikagéien, hexán és etil-acetát 1:2 arányú oldószerelegyben kifejlesztett rétegkromatogramon 0,35 R/-értéknél jelenik meg a termék foltja, mellette, 0,42 R/-értéknél kisebb mennyiségű szennyezés található. c) 3-[ [(S)-2-[ [(2-Fenil-etil)-hidroxi-foszfinil] -oxi] -3-fenil-l -oxo-propil] -amino] - -propánsav dilítiumsója 840 mg (1,7 mmól), a b) pont szerint előállított észtert feloldunk 25 ml etil-acetát és 2,5 ml ecetsav elegyében, hozzáadunk 225 mg 10% -os csontszenes palládiumkatalizátort, majd lassú áramban, 1 atmoszféra nyomáson, hidrogéngázt vezetünk át az elegyen. 3 óra múlva a reakcióelegyet átszűrjük egy mikrokristályos cellulóz rétegen, vákuumban betöményítjük, majd toluollal és metilén-dikloriddal azeotrop desztillációf végzünk. Végül vákuumban bepárolva 520 mg nyers savat kapunk. A savat feloldjuk vizes metanolban, és hozzáadunk 1,2 ml 2 N lítium-hidroxid oldatot. Az elegyet ezután Milipore szűrőn megszűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot a lehető legkisebb mennyiségű vízben feloldjuk, és egy 150 ml-es, HP-20 adszorbenssel töltött oszlopon kromatografáljuk, 500 ml víz és 500 ml acetonitril elegyével grádienselúciót végezve. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk, aminek eredményeképpen 460 mg nyers dilitiumsót kapunk. Ezt az anyagot ezután teljes egészében még egyszer felvisszük egy pontosan ugyanolyan oszlopra, és azonos körülmények között eluáljuk, aminek eredményeként 413 mg részlegesen tisztított termékhez jutunk. Egy másik kísérletből kapott, hasonló tisztaságú termék 510 mg-nyi mennyiségével egyesítve, két részletben ismételten kromatografáljuk a terméket egy 150 ml-es HP-20 adszorbenst tartalmazó oszlopon, 500 ml víz és 500 ml acetonitril elegyével grádiens elúciót végezve. A terméket tartalmazó frakciókat most is egyesítjük és liofilizáljuk, aminek eredményeképpen a 3- [ [ (S) -2- [ [ (2-fenil-etil) -hidroxk -foszfinil] -oxi] -3-fenil-l-oxo-propil] -amino] - -propánsav dilítiumsóját kapjuk, fehér szilárd anyag formájában. Az olvadáspontja 195-től kezdődően 250°C-ot meghaladó érték. [gc]d = =-35,3° (c=l, metanol). Vékonyréteg-kromatográfiás R/-értéke sziiikagéien, kloroform, metanol és ecetsav 4:1:1 arányú elegyében; :0,56. 3. példa 3- [ [ (S)-2- [( Benzil-hidroxi-foszfinil )-oxi] -3- -fenil-1-oxo-propil] -amino] -propánsav dilítiumsója a) Dimetil-(benzil-foszfonát) 43,43 g (350 mmól) trimetil-foszfitot nitrogéngáz áramban 90°C-ra melegítjük, és hozzácsepegtetünk 17,10 g (100 mmól) benzil-bromidot. Az adagolás befejeztével a reakcióelegyet éjszakán át, nitrogéngáz áramban, visszacsepegő hűtő alatt forraljuk. A reagá- 6 ' 9 iatlan trimetil-foszfitot és a dimetil-(métil-foszfonát)-ot vákuumdesztillációval távolít - juk el az elegyből (az üst hőmérséklete 120°C, 3,4 kPa-on), aminek eredményeképpen 29,8 g nyersterméket kapunk, mint desztillációs maradékot. A tisztítást flash-kromatográfiával, 300 g Merck 9385 sziiikagéien végezzük, az eluens petroléter és aceton 3:1 arányú elegye. Az így kapott dimetil-(benzil-foszfonát) színtelen olaj, melynek tömege 5,5 g. Szilikagél vékonyrétegen, petroléter és aceton 1:1 arányú elegyével kromatografálva, R/=0,48. b) 3- [ [ (S)-2- [(Benzil-metoxi-foszfinil)-oxi] -3-fenil-l-oxo-propil] -atnlno] -propánsav-benzil-észter 1,20 g (6 mmól) dimetil-(benzil-foszfonát) -ot feloldunk 15 ml vízmentes benzolban, és nitrogéngáz alatt hozzáadunk 1,3 g (6,3 mmól) foszfor(V)-kloridot. A reakcióelegyet 30 percen át szobahőmérsékleten, majd további 45 percet 60°C-on kevertetjük. Az oldószert vákuumban ledesztilláljuk, a maradékot vízmentes benzolban feloldjuk, majd vákuumban ismételten bepárolva kapjuk a klór-foszfonátot. A fenti klór-foszfonát 6 ml vízmentes metilén-dikloriddal készült oldatiához 1,96 g (6 mmól) 3- [ ((S)-3-fenil-2-hidroxi-í-oxo-propil] -amino] -propánsav-benzil-észtert és 89 mg (0,6 mmól) 4-( 1 -pirrolidinil) -piridint adunk 6 ml metilén-dikloridban oldva. A reakcióelegyet jégfűrdőbe helyezzük, és nitrogéngáz alatt, cseppenként beadagoljuk 814 mg (6,3 mmól) etil-diizopropil-amin 6 ml metilén-dikloriddal készült oldatát, majd 1 óra hosszáig hidegen éjszakán át pedig szobahőmérsékleten kevertetjük. Vákuumban bepárolva az elegyet, a maradékot 175 ml etil-acetátban oldjuk fel, és egymást követően mossuk 40—40 ml 10%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldattal, vízzel, 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, megint vízzel, és végül nátrium-klorid-oldattal, magnézium-szulfáton szárítjuk és vákuumban bepároljuk. Az így kapott nyerstermék tömege 3,9 g, amelyet 390 g Merck 9385 sziiikagéien flash-kromatográfiával tisztítunk. Az eluálást etil-acetát-hexán 2:1 arányú eleggyel kezdjük, majd 1% metanolt tartalmazó etil-acetáttal folytatjuk. A tisztított 3- [ {(S)-2-[(benzil-metoxi-foszfinil)-oxi] -3-fenii-l-oxo-propil] -amino] -propánsav-benzil-észter tömege 1,73 g, vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke 0,46, sziiikagéien, 1% metanolt tartalmazó etil-acetáttal kromatografálva. Kisebb mennyiségben a termék szennyezéseket tartalmaz, amelyek R/-értéke 0,62 és 0,74. c) 3* l [ (S )-2- [ ( Benzil-metoxi-f oszt inil )-oxi] -3-fenil-l-oxo-propil] -amino] -propánsav 1,7 g (3,43 mmól), a b) pont szerint előállított propánsav-benzil-észtert feloldunk 50 ml etil-acetát és 5 ml ecetsav elegyében, hozzáadunk 500 mg 10%-os csontszenes palládiumkatalizátort, majd 1 atmoszféra nyomá-10 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
