198953. lajstromszámú szabadalom • Eljárás enkefalináz gátló hatású glikopeptidek, aminosav származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 198953 B 2 A 2. ábra az enkasztin(D)VD 270 MHz *H-NMR-spektrumát (D20) mutatja. 12. példa N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-D-izoleucíl-aszparaginsav szintézise 1 g D-izoleucil-aszparaginsav és 5 g D-glükóz 100 ml metanol és 10 ml piridin elegyével készített oldatát a 10. példa szerinti módon átalakítjuk és tisztítjuk. Fagyasztva szárítással 790 mg tiszta, amorf anyagot kapunk. A 3. ábra az enkasztin (D)ID 270 MHz-*H-NMR-spektrumát mutatja. 13. példa N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-izoleucil-aszparaginsav-mono-terc-butilészter sztintézise 7 g izoleucil-aszparaginsav-mono-terc-butilésztert all. példa szerinti módon reagáltatunk és tisztítunk. így 5,8 g amorf fagyasztva szárított terméket kapunk, amely N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-izoleucil-aszparaginsav-mono-terc-butilészter. A 4. ábra az enkasztin ID-OtBu IR-spektrumát mutatja. 14. példa N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-D-hexahidro-fenil-glicil-aszparaginsav szintézise 300 mg D-hexahidro-fenil-glicil-aszparaginsavat (D-Hhp-Asp) 1,5 g glükózzal a 10. példa szerinti módon reagáltatunk. íly módon 260 mg amorf N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-D-Hhp-Asp-t kapunk, amelynek IR-spektrumát az 5. ábra mutatja. 15. példa N-( 1,6-di-dezoxi-frukto-furanóz- l-il)-(D)-valil-aszparaginsav 0,5 g (D) vallil-aszparaginsavat a 9. példa szerinti módon 1 g 6-dezoxiglükózzal reagáltatunk és tisztítjuk. Fagyasztva szárítás után 314 g N-(l,6-di(dezoxi-fruktofuranóz)-l-il)-(D)-vallil-aszparaginsavat kapunk. IC50-érték: 5,5 x 10’9 mól/l. ’H-NMR-jelek: 4,36, 2,63, 2,42, 3,88, 1,59, 0,92,0,88, 4,02, 3,70, 3,20, 2,78,1,25. 16. példa N-(hidroxi-aceton-3-il)-(D)-valil-aszparaginsav 1 g (D) Val-As,.-t a 9. példa szerinti módon 2 g glicenrínaldehiddel reagáltatunk és tisztítjuk, azonban az ioncserélővel végzett tisztításnál a pH-érlék 8. íly módon sótalanítás és fagyasztva szárítás után 130 mg N-(hidroxi-aceton-3-il)-(D)-valil-aszparaginsavat kapunk. ICjQ-gátlási érték: 1,5 x 10 “ mól/l. lH-NMR-jelek; 4,58, 2,82, 2,62, 3,83, 2,27, 1,09,1,04, 4,09, 3,82, 3,29. 17. példa N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-(D)-leucil-triptofán 0,6 g (D)-leucil-triptofánt a 9. példa szerinti módon 10 g (D)-glUkózzal reagáltatunk és tisztítunk. Fagyasztva szárítás után 327 mg N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-(D)-leucil-triptofánt kapunk. Az enkefalináz gátlás: ICjq - 9,5 x 10'9 mól/l. ’H-NMR-jelek: 7,77, 7,54, 7,28, 7,27, 7,21, 4,73, 3,51, 3,18, 1,19, 0,88, 0,69, 0,67, 3,98, 3,77, 3,67, 4,02, 3,72, 2,69, 2,61. 18. példa N-(l-dezoxi-xílulóz-l-íl)-(D)-valil-aszparaginsav 1 g (D) valil-aszparaginsavat a 9. példa szerinti módon 6 g (D) xilózzal reagáltatunk és tisztítunk. íly módon 244 mg N-(l-dezoxi-xilulóz-l-il)-(D)-valil-aszparaginsavat kapunk. Az enkefalinázgátlás: ICjp“ 1,4 x 10"8 mól/l. FAB töme «spektroszkópiával meghatározott móltömeg: M*H+ = 375,1337 (elemi érték: M + H+- 375,133951). Az ábrák értelmezése: 1. ábra: a 3. példa szerinti enkasztin VD (Fru-Val-Asp) 'H-NMR spektruma; 2. ábra: all. példa szerinti enkasztin (D)VD (Fru-D-Val-Asp) ’H-NMR spektruma; 3. példa: a 12. példa szerinti enkasztin (D)ID (Fru-D-Ile-Asp) H-NMR spektruma; 4. ábra: a 13. példa szerinti enkasztin ID-OtBu (Fru-Ile-Asp-OlBu) *H-NMR spektruma; 5. ábra: a 14. példa szerinti (Fru-D-Hhp-Asp) 1 H-NMR spektruma. Az 'H-NMR spektrumokat D20-ban 270 MHz frekvencia mellett vettük fel. Az IR-spektrumok FTIR (Fourier-Transform-Infrarot) abszorpciós spektrumok, amelyeket KBr pirula alkalmazásával mértünk. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás (I) általános képletű glikoproteinek előállítására, az (1) általános képletben Sacch jelentése N-(l-dezoxifruktopiranóz-l-il)-, N-(l-dezoxitagatopiranóz-l-il)-, N-(l,6-didí zoxifruktofuranóz-l-il)-, N-(bidroxi-aceton-3- -il)- vagy N-(l-dezoxixilulóz-l-il)-csoport, A jelentése L- vagy D-formájú Alá, Val, Ile, Phe, Leu vagy hexahidrofenilgiicinil (Hhp), azzal a megszorítással, hogy amennyiben B jelentése kémiai kötés, ezek az aminosav-maradékok mindig D-formában vannak jelen, B jelentése kémiai kötés vagy L- vagy D-formájú Asn, Asp, Asp-mono-(Ci-C6)-alkilészter, Glu, Ser vagy Trp és R jelentése hidroxilcsoport —, azzal jellemezve, hogy a) azon (I) általános képletű vegyületek előállítására, amelyekben A jelentése Alá, Val, Ile, B jelentése Asp vagy Glu és R jelentése hidroxilcsoport, a Streptomyces albus ATCC 21838. deponálási számú mikroorganizmust vagy ennek variánsát vagy mutánsát tápközegben tenyésztjük, majd a kapott vegyületeket elkülönítjük és kívánt esetben tisztítjuk, hogy b) egy N-terminálisan szabad amino6avat tar5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
