198953. lajstromszámú szabadalom • Eljárás enkefalináz gátló hatású glikopeptidek, aminosav származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 198953 B 2 dótól lineárisan 0,5 mól/1 koncentrációig emelkedő vizes ecetsav-gradienssel szelektíven lemostuk az oszlopról. A savas eluátumokat összegyűjtjük és fagyasztva szárítjuk. Kitermelés: 720 mg fehér, amorf por. 'H-NMR spektrum (ppm): 4,43, 2,69, 2,48, 3,84, 1,93,. 1,50, 1,26, 0,93 és 0,89 (a molekula peptidészterei); 3,93, 3,91, 3,79, 3,66, 3,65, 3,17 valamint 3,14 (az inhibitor glükózrészei). 13C-NMR-spekirum (ppm): 54,63, 40,49, 66,79, 37,13, 26,12, 14,61 és 11,75 (peptidrészek), valamint 96,55, 70,91, 70,40, 69,96, 64,87 és 53,43 (glükózrészek). IR-spektrum sávok: 3400, 2920, 2860, 1595, 1400 és 1080 cm1. 5. példa Az N-( 1 -dezoxi-fruktopiranóz- l-il)-fenil-alanil-aszparaginsav előállítása 200 mg fenil-alanil-aszparaginsavat 1,5 g D- glükózzal 100 ml metanolban szuszpendálunk, majd hozzáadunk 20 mg nátrium-hidrogénkarbonátot, és a reakcióelegyet 2 órán keresztül forráspontig melegítjük. Ezután a reakcióelegyet a 4. példa szerinti módon tovább feldolgozzuk, és QAE-Sephadex kolonnán A —25 (1,8 cm x 23 cm, 60 ml) tisztítjuk, majd sótalanítjuk. íly módon 26 mg N-(l-dezoxi-fruktopiranóz-l-il)-fenilalanil-aszparaginsavat kapunk. Az enkasztin FD 270 MHz-H-NMR-spektruma: 3,03, 2,96, 3,65, 3,81, 3,94, 3,99, 3,67, 3,84, 3,17, 3,08, 7,36, 4,43, 2,71, 2,51 ppm. 6. példa Az N-(l-dezoxi-fruktopiranóz-l-il)-izoleuciI-szerin szintézise 200 mg izoleucil-szerint 1,5 g D-glükózzal az 5. példa szerinti módon átalakítjuk, és a reakcióterméket tisztítjuk. Az így kapott 12 mg N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-Ile-Ser-OH szerkezetét kémiailag és spektroszkópikusan megállapítottuk. Az enkasztin IS 270 MHz-'H-NMR spektruma (D20): 3,38, 3,34, 3,85, 3,98, 4,15, 4,09, 3,82, 4,45, 4,00, 3,95, 3,97, 2,15, 1,08, 1,79, 1,43, 1,06 ppm. 7. példa N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-izoleucil-aszparagin szintézise 300 ml izoleucil-aszparagint és 1,5 g D-glükózt az 5.'példa szerinti módon átalakítunk, és a reakcióterméket tisztítjuk. így 90 mg N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-Ue-Asn-t kapunk. Az enkasztin IN 270 MHz-'H-NMR-spektrurna (D20): 3,05, 4,07, 3,95, 3,79, 4,08 és 3,78 ppm, valamint 3,60, 1,89, 1,53, 1,28, 0,97 és 0,93 ppm, valamint 4,54, 2,84 és 2,69 ppm. 8. példa N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-valil-aszparaginsav szintézise 150 mg valil-aszparaginsavat 1 g galaktózzal az 5. példa szerinti módon átalakítunk és tisztítunk. íly módon 22 mg N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-valil-aszparaginsavat kapunk. D20-ban mért MHz 'H-NMR-spektrum: 3,16, 3,17, 4,02, 3,91, 2,68, 3,6 és 3,86 ppm, valamint 2,63, 2,22, 1,09 és 1,05 ppm, valamint 4,56, 2,81 és 2,60 ppm. 9. példa N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-D-valin szintézise 10 g vízmentes D-valint 75 g vízmentes D-glükózzal 500 ml száraz metanol, 100 ml dimetii-szulfoxid, valamint 150 ml piridin elegyében feloldunk, majd a reakcióelegyet 2,5 órán keresztül visszafolyató hűtó alatt melegítjük. Az így kapott mézszínű reakcióoldatot rotációs bepárlóban vákuumban töményítjük, így a metanolt és a reakció során keletkezó vizet eltávolítjuk. A még piridint tartalmazó koncentrátumot nedvesség kizárása közben szobahőmérsékleten 1 éjszakán keresztül állni hagyjuk, így a reakció teljessé válik. A terméket úgy tisztítjuk, hogy a reakcióelegyet vízben feloldjuk, az oldat pH-ját nátriumhidroxiddal 9-re beállítjuk, és az oldatot pH = 9- re beállított és egyensúlyba hozott QAE-Sepharose FF-oszlopra (5 cm x 50 cm) visszük. Az ioncserélőt először 0,1%-os ammónium-acetát oldattal (pH = 9,0) mossuk, majd 100% 0,1%-os ammónium-acetát-oldatról 100% 0,2 mólos ecetsavig változó gradienssel eluáljuk. Az eluátumot frakciókban összegyűjtjük, és az egyes frakciókat vizsgáljuk. Az 5,3 —5,5 pH-jú frakciók a tiszta, újonnan szintetizált inhibitort tartalmazzák. Ezeket összeöntjük és szárítjuk. A sótalanítást Sephadex G -15 molekulaszitával végezzük, és így előállítjuk a sómentes terméket. Víz-metanol elegyből 7 g N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-D-valint kristályosítunk. Op.: 125 -126 °C. 10. példa N-(1 -dezoxifruktóz- 1-il)-D-izoleucin szintetizálása 100 mg száraz D-izoleucint 300 mg vízmentes glükózzal, 40 ml metanol és 10 ml piridin vízmentes elegyével összekeverjük, a 9. példa szerint átalakítjuk és tisztítjuk, de a tisztítás során kisebb térfogatú kolonnát alkalmazunk. A végterméket kristályosítjuk, így 110 mg N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-D-izoleucint kapunk. Op.: 142- —144 °C. 11. példa N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-D-valil-aszparaginsav szintézise 10 g D-valil-aszparaginsav és 50 g vízmentes D-glükóz 300 ml piridin és 3 liter metanol ele-Eyével készített szuszpenzióját állandó keverés őzben 2,5 órán keresztül forrásponton melegítjük. Eközben a reagensek fokozatosan feloldódnak, és a reakcióeiegy aranysárga színű lesz. A reakció végén az eiegyet vákuumban töményítjük, és a 9. példa szerinti módon feldolgozzuk. A terméket fagyasztva szárítjuk, és így 13,5 g amorf N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-D-valil-aszparaginsavat kapunk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
