198953. lajstromszámú szabadalom • Eljárás enkefalináz gátló hatású glikopeptidek, aminosav származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 198953 B 2 létén. Utána a vizet eltávolítjuk, adott esetben azeotrópos desztillációval, a reakcióelegyet ismét állni hagyjuk, és végül az N-helyettesített izo-cukoramint szárítjuk. A találmány szerinti eljárással előállított en- 5 kefalináz-inhibitorok különösen előnyösek főleg különböző fájdalmak, így például fogfájás, krónikus fertőzéssel összefüggő fájdalmak kezelésére, hő vagy sav hatására fellépő fájdalom kezelésére, stressz hatására létrejött fájdalom, valamint rá- 10 kos megbetegedések végső stádiumának kezelésére. Ezen kívül az (I) általános képietd enkefalináz-inhibitorokat alkalmazhatjuk lelki feszültség kezelésére. Ismert, hogy például a fájdalom-érzéskor és 15 félelemkor, aggódáskor endogén enkefalinok gyors kiválása történik, amelyek az úgynevezett opiát-receptorokkal történő kölcsönhatásban elnyomják ezeket az izgalmi hatásokat. Az enkefalinok azonban neuroközvetítői szerepüknek 20 megfelelően enkcfalinra fajlagos peptidázok, különösen az enkefalináz enzim hatására gyorsan inaktív peptidekké bomlanak. Az (I) általános képletű enkefalináz inhibitorok gátolják ezt a bomlást, aminek következtében az endogén mó- 25 dón kivált enkefalinok az opiát-receptorokra kifejtett hatásukat és így fájdalom-, illetve félelemelnyomó hatásukat hosszabb időn keresztül ki fejthetik. A találmány szerinti eljárással előállított ve- 3Q gyületek különleges tulajdonságaira még jellemző, hogy nemcsak az enkefalináz által történő enkefalin lebomlást gátolják, hanem saját analgetikus hatásuk is van. így az (I) általános képlettel meghatározott enkefalináz-inhibitorok az 35 opiát-receptorokra közvetlenül is kifejthetik hatásukat. Enkefalináz-vizsgálat Az enkaszlinok enkefalináz-gátló hatásait iro- 40 dalomból ismert módszerrel állapítottuk meg /Roques, B. P. és munkatársai (Life Sciences (1982), 1749 -1752)/. Enzimként irodalomból ismert módszerrel (Mumford, R.A. és munkatársai 1982, Biochem. Biophys, Rés. Commun. 45 109, 1303-1309) patkány veséből kioldott enkefalináz-készítményt alkalmaztunk. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek által elért 50%-os enkefalináz gátlást, azaz az ICso-értéket, ismert módszerrel koncentráció-sorral ha- 5C tároztuk meg, amikoris az inhibitorokat 60 percig enzimmel szobahőmérsékleten előinkubáltuk. Az előinkubálás a szubsztrátum adagolása előtt, az enzim reakció elindítása előtt történt. Gátlás nélküli reakciókhoz megfelelő kontroll 55 vizsgálatokat végeztünk inhibitor alkalmazása nélkül. Enkefalináz-gátlás ICjo (mól/1) 1. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)- 1,3.10‘9 60-D-Val-Asp 2. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)- 1,8.10"9-D-Ile-Asp 3. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)- 1,8,10‘9-Ilc-Asp 65 4. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)- 6,3.10*9-Val-Asp 5. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)- 5,6.10"8-Phe-Glu 6. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)- 3,4.10"8-Val-Glu 7. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)- 3,4.10"8-ile-Asp 8. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)- 5,6.10'8-Ile-Glu 9. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)- 7,0.10 8-Ile-Asp(OtBu) 10. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)- 7,5.10"8-Hhp-Asp 11. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)- 2,1.10'7-Ile-Ser 12. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)- 2,3.10"7-D-Val 13. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)- 3,2.10‘7-Val-Asp 14. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)- 3,4.10‘7-D-Ile Az enkasztinokat adagolhatjuk önmagában vagy kombinációban parenterálisan vagy orálisan, fiziológiailag elfogadható közegben. Az adagoláshoz felhasznált dózis 0,1 —10 mg/kg. 1. példa Enkaszlinok fermentációs kinyerése (20001) Az enkafalináz-inhibitorok fermentációs kinyeréséhez a Streptomyces albus ATCC 21838 törzs fagyasztva szárított tartós formáját tenyésztettük. A tenyésztést először steril Petri-csészében szilárd táptalajon végeztük. Az elkülönült telepeket ezután ferde csövekben tovább tenyésztettük, majd ezekből a tenyészetekből a spórák fermentációhoz szükséges tömegtermelését Roux-lombikokban elvégeztük. Agarközeg szilárd táptalajhoz: Dextrin 15,00 g/1 Nádcukor 2,00 g/1 Hús-extraktum 1,00 g—/I Élesztő-extraktum 2,00 g/1 Konyhasó 0,50 g/1 FeS04.7M20 0,01 g/1 K2HP04 0,50 g/1 Agar-Agar 2,00 g/1 pH-érték 7,3 Sterilizálás: 120 °C, 20 perc Inkubálás: 30 °C, 9 nap Egy Roux lombikban kiülepedett spórákat 100 ml steril vízzel szuszpendáljuk, és ezt oltóanyagként használjuk fel az első süllyesztett vegetatív-fermentáéiós előfokozathoz (térfogat: 1,2 liter). Az előfokozatban alkalmazott tömeg: Oldható keményítő 4,0 g/1 Glükóz 1.0 g/1 Kazein-pepton 1,0 g/1 Corn steep liquor (Sigma, München, NSZK) 0,4 g/1 Szójaliszt . 0,4 g/1 (NH4)2S04 0,8 g/1 4
