198951. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Új reningátló peptidek, valamint hatóanyagként ilyen peptidet tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 198951 B 2 il-acetáttal extraháljuk. Az exlraktumokat telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk és vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. Az oldószer elpárologtatása után 507 mg cím szerinti vegyületet kapunk, olvadáspontja 75 - 78 °C, faj^D * '59,0° (c = 0,3, metanol). (c) N-ÍS-(-)-2-Metil-butill-4(Sj-[N-metoxi-etoxi-etoxi-karbonil-3-(l-naftil)-L-alanil-L-hisztidin-amino-3(S)-hidroxi-6-metü-heptánsavamid 61 mg (30 mmól) diciklohexil-karbodiimidet adunk 113 mg (0,28 mmól) L-hisztidil-4(S)-amino-3(S)-hidroxi-6-metil-heptanoil-2-metil-butilamin-di(hidrogén-klorid), 93 mg (0,25 mmól) N- meioxi-etoxi-etoxi-karbonil-l-naftil-L-alanin, 94 mg (0,7 mmól) 1-hidroxi-benzolriazol és 68 mg (67 mmól) N-metil-morfolin 2 ml dimetil-formamiddal készült oldatához, és az elegyet 0 °C-on 1 órán át, majd szobahőmérsékleten 3 órán át keverjük. Az elegyhez etil-acetátot adunk, majd 1 n hidrogén-klorid-oldattal, vízzel, telített, vizes nálrium-hidrogén-karbonát-oldattal és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, a fenti sorrendben, majd vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. Az oldószert csökkentett.nyomáson ledeszlilláljuk, és a maradékot szilikagélen vékonyréteg-kromatográfiás eljárással tisztítjuk, a futtatott kloroform és metanol elegyével végezzük. 91 mg cím szerinti vegyületet kapunk, színtelen, szilárd anyag formájában, olvadáspontja 160- 163 °C; [a]öD = -38,3 (c = 0,3, metanol). 28. példa Etil-N-benzil-oxi-karbonil-3-(l-naftil)-L-alanil-L-hisztidil-4(S)-amino-3-merkapto-6-metilheptanoát előállítása (a) Etil-4(S)-terc-butoxi-karbonil-amino-6- metil-2-heptanoát 10 g (0,035 mól) etil-4(S)-terc-butoxi-karbonil-amino-3(S)-hidroxi-6-metil-heptanoátot és 9,9 g (0,052 mól) p-toluol-szulfonil-kloridot jeges hűtés közben 30 ml piridinben oldunk, és az elegyet szobahőmérsékleten egy éjszakán át keverjük. Amikor az elegyből vett minta vékonyréleg-kromatogrammjában (szilikagél lemez, benzol és etil-acetát 5:1 térfogatarányú elegyével futtatva) a heptanoát foltja többé nem látható, az elegyhez 10 ml trietil-amint adunk és szobahőmérsékleten 2 napon át keverjük. Az elegyhez 10%-os citromsavoldatot adunk, és etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist 10%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, és vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. Az oldószert csökkentett nyomáson elpárologtatjuk és a kapott maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiás eljárással tisztítjuk, az eluálást metilén-kloriddal végezzük. 8,1 g cím szerinti vegyületet kapunk. (b) Etii-4(S)-terc-butoxi-karbonil-amino-3- (4-metoxi-benzil-tio)-6-metil-heptanoát 3,5 g (0,013 mól) elil-4(S)-terc-butoxi-karbonil-amino-6-metil-2-heptanoát és 3,5 g (0,025 mól) metoxi-benzil-tiol 10 ml dimetil-formamiddal készült oldatához 2 ml trietil-amint adunk, és az oldatot szobahőmérsékleten 1 napon át keverjük. Az elegyet jeges vízbe öntjük, majd etil-acetáttal extraháljuk. Az extraktumokat 10%-os vizes citromsavoldattal, 10%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és telített vizes nátriumklorid-oldattal mossuk, a fenti sorrendben, majd vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. Az etil-acetátot vákuumban elpárologtatjuk és a maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiás eljárással tisztítjuk, az eluálást metilén-kloriddal végezzük. 4,6 g cím szerinti vegyületet kapunk, olaj formájában. (c) Etil-N-benzil-oxi-karbonil-3-( l-naftil)-L- alanil-L-hisztidil-4(S)-amino-3-(4-metoxi-benzil-tio)-6-metil-heptanoát 1,1 g (2,22 mmól) benzil-oxi-karbonil-3-(lnaflil)-L-alanil-L-hisztidil-hidrazidot 10 ml dimetil-formamidban oldunk, és az oldathoz 1 ml 4 n dioxános hidrogén-klorid-oldalot adunk.. A kapott oldathoz 300 mg (2,56 mmól) izoamil-nitritet adunk jeges hűtés mellett, és az elegyet keverjük. A hidrazid eltűnését hidrazid-reagens segítségével megállapítjuk, majd az elegyet trietilamin hozzáadásával meglúgosítjuk. 1,0 g (2,22 mmól) etil-4(S)-terc-butoxi-karbonil-amino-3-(4-metoxi-benzil-tio)-6-metil-heptanoátot — melyet a b) lépésben állítunk elő - és 5 ml 6 n dioxános hidrogén-kloridot elegyítünk, és az elegyet szobahőmérsékleten 30 percen át keverjük. Az oldószert csökkentett nyomáson elpárologtatjuk és a maradékot 5 ml dimetil-formamidban oldjuk. A dimetil-formamidos oldatot a fent előállított trietil-aminos oldathoz adjuk. Az elegyet 4 °C-on 24 órán át keverjük, miközben az elegy pH-ját bázikus tartományban tartjuk. Az elegyet jeges vízbe öntjük és etil-acetáttal extraháljuk. Az extraktumokat 10%-os vizes citromsavoldattal, 10%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd vizes, telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, és vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. Az oldószert elpárologtatjuk és a maradékot szilikagélen vékonyréteg-kromatográfiás eljárással tisztítjuk, a futtatást metanol és kloroform 1:5 térfogatarányú elegyével végezzük. Kloroform és hexán elegyéből az anyagot újra kicsapva 0,96 g cím szerinti vegyületet kapunk, színtelen por formájában, olvadáspontja 73-76 °C. Elemanalízis eredmények a C45H53N5O7S összegképlet alapján: számított: C = 66,89%,H = 6,61%,N = 8,67%,S = 3,97%; talált: C - 66,52%,H - 6,59%,N = 8,77%,S = 3,88%. (d) Etil-N-benzoil-oxi-karbonil-3-(l-naftil)L-alanil-L-hisztidil-4(S)-amino-3-(3-nitro-2-piridil-ditio)-6-metil-heptanoát 300 mg (0,37 mmól) etil-N-benzil-oxi-karbonil-3-(l-naftil)-L-alanil-L-hisztidil-4(S)-amino- 3-(4-metoxi-benzil-tio)-6-metil-heptanoátot 20 ml 10:1 térfogatarányú metilén-klorid-ecetsav elegyben oldunk, hozzáadunk 106 mg (0,56 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 20
