198908. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kinon származékok és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
21 22 HU 198908 B Gyógyászati készítmény előállítása A) Kapszulák 5 14. példa (1) 1. számú vegyület 50 mg (2) nagyon finom cellulózpor 30 mg (3) laktóz 37 mg (4) magnézium-sztearát 3 mg összesen 120 mg Az (1), (2), (3) és (4) komponenseket összekeverjük és zselatin kapszulákba töltjük. B) Lágy kapszulák 15 (1) 17. számú vegyület 50 mg (2) kukoricaolaj 100 mg összesen 150 mg Az (1) és (2) komponenseket ismert módon összekeverjük és lágy kapszulákba tölt- 20 jük. C) Tabletták (1) 18. számú vegyület 50 mg (2) lak tóz 34 mg (3) búzakeményitő 10,6 mg (4) búzakeményitő (paszta) 5 mg (5) magnézium-sztearát 0,4 mg (6) kalcium-karboxi-metil- 20 mg-cellulóz összesen 120 mg A komponenseket ismert módon összekeverjük és tablettázógépen tablettákká sajtoljuk. 25 30 35 1. kísérleti példa Az 5-lipoxigenáz gátlása 40 107 RBL-1 sejteket (patkány bazofil leukémia sejtek) 0,5 ml MCM-ben (fehérvérsejt közeg) szuszpendáltunk. A szuszpenzióhoz egymást kővetően hozzáadtunk egy olyan oldatot, amely 0,5 ml MCM-t, 50 ug arachidon- 45 savat, 10 pg A-23187-t (kalcium ionofor, Eli Lilly) tartalmazott, majd a vizsgálat alatt álló kinon vegyületek etanolos oldatát, amelynek végső koncentrációja 1 /uniói, 0,1 pmól, 0,01 rumól, illetve 0,001 /umól volt és a reakci- 50 óelegyet 37 °C hőmérsékleten 20 percig hagytuk reagálni. A reakció befejeződése után 4 ml etanolt, amely l,4-dimetoxi-2-metil-3-(3-metoxí-propil)-naftalint tartalmazott, adagoltunk belső standardként és rázással 55 jól elkevertük az elegyet, majd 10 percig szobahőmérsékleten hagytuk állni. A kapott reakcióelegyet 10 percig centrifugáltuk (2000 ford/perc) és a felülúszót elválasztottuk. A felülúszót szárazra pároltuk csökken- 60 tett nyomáson. A visszamaradó anyaghoz 0,5 ml 60%-os vizes metanolt adtunk. A kapott oldat egy század ml-nyi mennyiségét 65 nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás módszerrel kvantitatív analizáltuk 5-HETE-re (5-hidroxi-eikozatetraénsav). Az 5-HETE mennyiségét a 273 nm-nél mutatott.UV.-elnyelés alapján határoztuk meg. Az 5-HETE termelés gátló hatását (IE) az (1-b/a) x 100 képlettel számítottuk, ahol a jelentése a kinonvegyület nélküli belső standard csúcséval korrigált csúcsmagasság illetve terület és b jelentése a kinonvegyület jelenlétében a belső standarddal kapott csúcscsal korrigált csúcsmagasság illetve terület. A 3. táblázatban bemutatott eredmények alapján az 5-HETE termelésének gátlása bizonyított. 2. kísérleti példa A tromboxán-Az-szintetáz (TXAz) gátlása TXA2-szintetáz készítményként Needlemann és munkatársai (Science 193 163, 1979) szerint indometacinnal kezelt ló vérlemezke mikroszómákat (indomethacin-treated horse platelet microsome: IPM) alkalmaztunk.' 60 /uliter, IPM-nek 50 jumól Trisz-pufferben (pH == 7,5, 140 /ug protein-bázist tartalmaz) készített oldatához hozzáadtuk a vizsgált hatóanyagnak 60 jul-nyi különböző koncentrációjú oldatát és a reakcióelegyet 5 percig szobahőmérsékleten tartottuk. A kapott reakcióelegyból kivettünk 1 század /ul-nyi mennyiséget, ehhez 20 pl, 30 ng prosztaglandin Hr-t (PGHr-t) tartalmazó puffert adtunk jéghűtés közben és a továbbiakban a reakcióelegyet 5 percig tartottuk 0 °C hőmérsékleten és igy troinboxén A2 (TXA2) termelődött. A reakciót 500 pl trisz-puffernek az adagolásával leállított és a kapott oldatból 50 jul-nyi mennyiséget rédióimmunológiai vizsgálatnak vetettünk alá és meghatároztuk a tmmboxán-Bz (TXBz), a stabil TXA2 metaboíitok mennyiségét (Shibouta és munkatársai, Biochem. Pharmacol. 28 3601, 1979). A TXAz-szintetáz gátlását (X) a kezeletlen és a kezelt csoportok közötti TXB2 termelés különbségéből határoztuk meg. Az eredményeket a 3. táblázat tartalmazza. 3. kísérleti példa Zsírperoxidok termelésének a gátlása patkányok agyhomogenizátumában Az eljárás: Pentobarbitallal (50 mg/kg, intraperitoneálisan adagolva) altatott Sprague-Dawley patkányok (hím patkányok, 9-15 hetesek) erét elvágtuk és az agyszövetet kimetszettük. A szövetet foszfátpufferben (pH = 7,4) homogenizáltuk és 5%-os homogenizátumként (súlyra számítva) alkalmaztuk. Az agyhomogenizátumot 37 °C hőmérsékleten 1 órán ét 13
