198836. lajstromszámú szabadalom • Liposzómák képzésére alkalmas készítmény
13 HU 198836 n 14 Az arginin-koncentráció hatása a liposzóma méretéve 502 mg dipalmitoil-foszfatidil-kolirihoz (DPPC) 10 mikroliter (2-palmitoil-l-C14) (0,1 mCi/ml)-diplamitoil-foszfatidil-kolint adunk. Kloroformot adunk az oldathoz, hogy a radioaktív anyag tökéletesen elkeveredjen, majd az elegyet bepároljuk. 195 mg olajsavat (OA) keverünk ezután a lipidbe pépet képezve. 119 mg arginint tartalmazó 5 ml desztillált vizet adunk ezután a maradékhoz, és 45 °C hőmérsékleten keverve tiszta gélt képezünk. A gélből 1-1 grammot bemérünk 4 különböző ampullába, és arginint adunk hozzá a következő összetételbe I. TÁBLÁZAT 18. példa Minta Minta összetétele DPPC:OA:Arg 1. ampulla + 1 ml víz (1:1:1) 2. ampulla + 1 ml 50 mg/ml koncentrációjú vizes arginin-oldat (1:1:3) 3. ampulla + 1 ml 84 mg/ml koncentrációjú vizes arginin-oldat (1:1:5) 4. ampulla + 1 ml 192 mg/ml koncentrációjú vizes arginin-oldat (1:1:10) Az egyes oldatok 0,5 grammjait hígítjuk 50 ml foszfáttal pufferolt konyhasóoldatban (pH 7,8). A becsült átmérőt Sephacryl S-1000 oszlopkromatográfiás elemzésből kapjuk, 14C-izotóppal jelzett DPPC-t alkalmazva. A hatásokat az alábbi II. táblázatban adjuk meg. II. TÁBLÁZAT Az arginirt hatása a liposzóma méretére Rendszer PH Becsült liposzóma átmérő (nm) DPPC:OA:Arg 7.8 220 (1:1:1) DPPC:OA:Arg (1:1:3) 7.8 140 DPPC:OA:Arg (1:1:5) 7.8 90 DPPC:OA:Arg (1:1:10) 7.7 20 A plf hatása a liposzóma méretére A fentieken kívül a liposzóma mérete a vizes pufferoldat pH-jának változtatásával is változtatható. 100 mg dipalmitoil-foszfatidil-kolinhoz (DPPC) 25 mikroliter (2-palmítoil-l-C14) (0,1 mCi/ml) dipalmitoil-foszfatidil-kolinl adunk. Az oldathoz kloroformot adunk, hogy a radioaktív anyag tökéletesen elkeveredjen, majd bepároljuk. 40,1 mg olajsavat keverünk ezután a lipidhez, és pépet képzünk. 24 mg/ml-es, vizes arginin-oldat 1 ml-ét adjuk a lipid-keverékhez, és 45 °C hőmérsékleten keverve tiszta gélt állítunk elő. Ennek a gélnek 100 mg-os alikvotjait hígítjuk 10 ml foszfál-pufferban pH 9,0-nál, illetve pH 7,4-nél. A becsült átmérőt (A) ismét a Sephacryl S-1000 oszlopkromatográfiás elemzés adataiból kapjuk meg, a ,4C-izotóppal jelzett dipalmitoil-foszfatidil-kolint alkalmazva. Az eredményeket a III. táblázatban adjuk meg. III. TÁBLÁZAT 19. példa A pH hatása a liposzóma méretére Rendszer pH Becsült golyóátmérő DPPC:OA:Arg (1:1:1) 7.4 300 DPPC:OA:Arg (1:1:1), 7.8 220 DPPC:OA:Arg (1:1:1) 9.0 25.4 így a liposzóma-hólyagocskák kívánt méretét be lehet állítani az arginin-koncentt-áeió vagy a vizes pufferoldat pH-jának változtatásával. 20. példa Liposzóma stabilitás Steril liposzómákat készíthetünk a hővel sterilezett pre-liposzóma-gélből. Egy másik módszer szerint a liposzóma gélt vagy a liposzómákat sterilre lehet szűrni megfelelő sterilező szűrőn. DPCC:OA:Arg( 1:1:2) arányú, pH 8,0-nál készített liposzómákat hővel sterilezőnk, és szobahőmérsékleten tároljuk mintegy 1 éven át. antimikrobáns szerek és antioxidánsok nélkül. Baktérium fejlődést, elszíneződést vagy' kicsapódást, nem észlelünk. Az egy éves liposzómák negativ festésű elektronmikroszkópos vizsgálata szerint a liposzóma-hólyagocskák stabilak. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
