198836. lajstromszámú szabadalom • Liposzómák képzésére alkalmas készítmény
7 HU 198836 B 8 A hidratálószereket bármilyen keverék formájában használhatjuk, korlátozás nélkül. Gyakorlati szempontból előnyös, ha a liposzómákat negatív töltéssel rendelkező liposzóma-képző anyagok segítségével készítjük, ez esetben előnyös olyan hidratálószereket alkalmazni, amelyek legalább egy ionizálható nitrogénatomot tartalmaznak; ilyen pl. az arginin. Fordítva viszont, ha a liposzómák képzéséhez használt amfipatikus anyagok nitrogénalapúak, előnyös kétbázisú savakat alkalmazni, ilyen pl. a glutaminsav. A találmány szerinti eljárásban szereplő hidratálószerek számos vegyszergyártó katalógusában szerepelnek, az ilyen gyártók rendszeresen gyártják ezeket, vagy a szakterületen ismert módszerekkel előállíthatok. Az arginin, homoarginin, lizin, glutaminsav, aszparaginsav és más természetben előforduló aminosavak fehérjék hidrolízisével és az egyes aminosavak elkülönítésével vagy bakteriális forrásokból állíthatók elő. A liposzóma-képző anyagok és egy vagy több hidratálószer keveréke az összes liposzóma-képző anyaghoz viszonyítva max. 300 mól vízmennyiséggel olyan gélt ad, amelyből közvetlenül liposzómák keletkeznek vizes oldat hozzáadására. Ezt a gélt pre-liposzóma gélnek nevezzük, i) szerkezeti jellemzői miatt, amely lényegében azonos a liposzómák szerkezeti jellemzőivel, és ii) a gélnek azon tulajdonsága miatt, hogy liposzómákká alakul vizes oldattal való hígítására. Amennyiben a víz mennyisége 300 mól fölötti, megindul a liposzómák képződése. Ez a gél nagy rendezettségi fokú folyadék! istály, amely optikailag tiszta oldatot kép* . A folyadékkristály X, Y és Z dimenziói változnak a hidratálószer koncentrációjának változtatásával állandó pH mellett, valamint az oldat pH-jának függvényében. A hidratálószer koncentrációját állandó pH-n változtatva, vagy a pH-t változtatva, miközben a hidratálószer koncentrációját állandó értéken tartjuk, a létrejövő liposzóma hólyagocskák lipid kettős rétege lamellás szerkezeteinek méretét és számát szabályozhatjuk. A gélszerkezet maga mintegy 300 mól vizet tud befogadni 1 mól lipidre vagy zsírsavra számítva anélkül, hogy ez zavarná a gél szerkezetét. A gól szerkezete, amint ezt 31 P-NMR spektroszkópiával meghatároztuk, több lamelláris lipid kettős rétegből és hidrofil rétegből áll össze, egymással összetapadva, egymást követő sorrendben. Az azonos gél 31P-NMR spektrum egy anizotrop csúcsot mutat, további bizonyítékot szolgáltatva, hogy a gél több lamelláris kettős rétegből áll. Ezt a gélt autoklávban lehet sterilezni. Ezen kívül a gél nem mutat elszíneződést és világos marad szobahőmérsékleten legalább egy évig az autoklávozás utón. A gélt továb- 6 bá szűréssel is lehet sterilezni megfelelő sterilező szűrőt alkalmazva. A gélt vizes oldatban diszpergálva hatékonyan és spontán módon liposzómák keletkeznek. A pre-liposzóma gél a kapszulázandó anyaggal együtt vagy anélkül dehidratálható (liofilizálható), és a por rehidratálható, és igv spontán módon képződnek liposzómák még hosszú időtartamú tárolás után is. A találmány szerinti készítmény különösen alkalmas vízérzékeny gyógyszerek esetén, ha hosszú időtartamú tárolás szükséges a felhasználás előtt. A találmány szerinti készítmény ill. eljárás alkalmazásával akár vízben oldhatatlan, akár vízoldható vegyi anyagokat, gyógyszereket, kozmetikumokat, élelmiszereket és hasonlókat építhetünk be a liposzómákba. Követ kezesképpen gyógyászati kezelés céljából a gél orálisan, parenterólisan, helyileg, intravénás úton, végbélkúp formájában, st.b. alkalmazható, és abból a hatóanyag felszabadul. A liposzómák alkalmazása nem korlátozódik csak emberben vagy emlősökben való felhasználásra, hanem bármilyen ipari, mezőgazdasági, gyógyszerészeti, kozmetikai vagy vegyi célra, felhasználhatók ahol a vegyieteket vagy' anyagokat lipid hólyagocskóban kapszulázva szükséges alkalmazni. A találmányt az alábbi példákkal szemléltetjük, anélkül, hogy a példákra korlátoznánk. 1. példa Liposzómák készítése (gélfázis) 3 g dipalmitoil-foszfatidil-kolint mérünk be 50 ml-es főzőpohárba. 1,2 g olajsavat adunk hozzá és összekeverjük, hogy egységes pép képződjék. 0,72 g arginint 30 ml ionmentesített vízben oldunk, majd hozzáadjuk a dipalmitoil-foszfatidil-kolin/olajsav péphez és 45 °C hőmérsékleten melegítjük. Kézzel keverve a keverék tiszta gélt képez. A gélt tároljuk, és később liposzómákat képezünk úgy, hogy a gélt foszfáttal pufferolt fiziológiás sóoldattal hígítjuk. 2. példa Liposzómák készítése 120 mg dipalmitoil-foszfatidil-kolint és 24 mg olajsavat. mérünk össze és alaposan keverjük mindaddig, amíg homogén fehér pép nem képződik. Ezután 20 mg arginint oldunk fel 60 ml foszfáttal pufferolt konyhasó-oldatban (ionerösség = 0,15; pH = 7,4). 5' 10 15 20 25 30 35 40 15 50 55 60 65
