198723. lajstromszámú szabadalom • Eljárás makrolid vegyületek és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 198723 B 2 antelmintikus hatás biztosítása céljából a hatóanyag mennyisége a takarmányban 0,0001 -■-0,02 tömeg%. A találmány szerinti eljárással előállított vegyülelek beadhatók parenterálisan is állatoknak az előgyomorba, izomzatba vagy a légcsőbe, vagy pedig s/ubkután injektálással, folyékony hordozóanyagban feloldva vagy diszpergálva, Parenterális beadás céljából a hatóanyagokat előnyösen egy alkalmas növényi olajjal, például földimogyoróolajjal vagy gyapolmagolajjal keverjük össze. Az ilyen típusú készítmények általában 0,05 — 50 tömeg% mennyiségben tartalmaznak hatóanyagot. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek alkalmazhatók helyileg is, miután öszszekevertük őket egy alkalmas hordozóanyaggal, például dimelil-szulfoxiddal vagy egy szénhidrogén típusú oldószerrel. Az ilyen típusú készítményt közvetlenül az állat testfelületére juttathatjuk ki spray formájában vagy direkt injektálással. A legkedvezőbb eredmények biztosításához szükséges orális dózis számos tényezőtől, például a kezelendő állat típusától és a parazita fertőzés típusától és mértékétől függ. Általában a dózis 0,01 — 100 mg, előnyösen 0,5 — 50 mg lesttömegkilogrammonként. A dózis beadható egyetlen alkalommal vagy több alkalommal viszonylag rövid időn, például 1 — 5 napon belül. A találmányt közelebbről a következő példákkal kívánjuk megvilágítani. 1. példa Milbemicin au, <>13 és ai4 (1., 2. és 3. vegyüld) Tíz darab 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban 1% szacharózt, 0,35% polipeptont és 0,05% dikálium-hidrogén-foszfátot tartalmazó előtenyésztési táptalajból 100 — 100 ml-t beoltunk egy oltókacsnyi Streptomyces hygroscopicus subsp. aureolacrimosus SANK 60286 törzzsel, majd 28 °C-on forgó rázatóberendezésben 48 órán át tenyésztést végzünk. Az így kapott 1 liternyi tenyészfolyadékot két 30 literes fermentorba bemérjük. Mindegyik 20 — 20 liter olyan táptalajt tartalmaz, amely 8% szacharózt, 1% szójababport, 1% fölözött tejet, 0,1% élesztőkivonatot, 0,1% húskivonatot, 0,3% kalcium-karbonátot, 0,03% dikálium-hidrogén-foszfátot, 0,1% magnézium-szulfát-heptahidrátot és 0,005% vas(Il)-szulfát-heptahidrátot tartalmaz, továbbá sterilizálás előtt pH-értéke 7,2. A tenyésztést 28 °C-on 12 napon át végezzük fermentorokban 0,5 térfogat/lömeg (wm) sterilizált levegőárammal 0,5 kg • cnrbelső nyomáson, 40-180 fordulat/perc keverési sebességgel és 4 —7 ppm. DO értéknél. A fermentléből 32 litert összekeverünk a tenyésztés után 1,8 kg Celite márkanevű szűrési segédanyaggal, majd szűrést végzünk. Micéliális szűrőlepényt 5 liter vízzel mossuk, majd a szűrletet és a mosófolyadékot elöntjük. A micéliális szűrőlepényt 20 liter metanollal 1 órán át keverjük, majd szűrés után ismét 5 liter metanollal mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékot elegyítjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk, közel 2 liter vizes maradékot kapva. Ezt a vizes folyadékot 2-2 liter hexánnal háromszor extraháljuk, majd az egyesített extraktumot vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítjuk szűrjük és bepároljuk, így 38 g mennyiségben olajos anyagot kapunk. Ebből az olajos anyagból 20 g-ot feloldunk 500 ml hexánban, majd a kapott oldatot olyan oszlopra visszük fel, amelyet 300 g, a Mallinckrodt Inc. amerikai egyesüli államokbeli cég által "Silica Type 60" márkanéven forgalmazott szilikagélből hexános kezeléssel készítettünk. Az eluálást 2 liter hexánnal, majd hexán és etil-acetát 3:1 térfogatarányú elegyéből 2 literrel végezzük. Az eluálódott frakciókat nagynyomású folyadékkromatográfiás módszerrel analizálva a milbemicin ujj, 1* 12, <*13, <*i4 és «15 anyagokat keverékként különítjük el. Az oldószer elpárologtatásakor 1,9 g mennyiségben olajos nyers terméket kapunk. Ennek teljes mennyiségét feloldjuk 10 ml 50%-os vizes metanolban, majd a kapott oldatot olyan oszlopra visszük fel, amelyet 160 g, a Merck Co. amerikai egyesült államokbeli cég által "Art 7719" márkanéven forgalmazott, szilánozotl szilikagélből 50%-os vizes metanollal végzőit kezeléssel készítettünk. Az eluálást 60%, majd 70%, majd 80%. metanolt tartalmazó vizes elcgyekkel végezzük. Az eluálódott frakciókat nagynyomású folyadékkromatografálással analizáljuk, a milbemicin «n, «12, £*13, aJ4 és anyagok elegyét elkülönítve. Az eluálószer elpárologtatásakor 840 mg mennyiségben olajos nyers terméket kapunk. Ennek teljes mennyiségét feloldjuk 20 ml acetonitrilben, majd a kapott oldatot preparatív nagynyomású folyadékkromatografálásnak vetjük alá fordított fázisú oszlopon, éspedig a Senshu Co. japán cég "ODS H —5251" márkanevű, 20 mm - 250 mm méretű oszlopán. Az oldatból minden esetben 1 ml-es mintákat juttatunk az oszlopra. Az eluálást 80% acetonitrilt tartalmazó vizes eleggyel 9,9 ml/perc átfolyási sebességgel végezzük. A frakciókat 240 mm-nél ibolyántúli fénxynyel analizáljuk, és így az egyes termékeket tartalmazó frakciókat elválasztjuk egymástól. Minden egyes frakcióból azután az eluálószert ledesztilláljuk, majd a visszamaradó vizes maradékot liofilizáljuk. így az eluálás sorrendjében minden esetben por formájában 128 mg milbemicin «11 t, 11,7 mg milbemicin «12-t, 14,8 mg milbemicin «13.1, 43 mg milbemicin °14‘1 ^ m8 milbemicin «15-t kapunk. milbemicin an Elemzési eredmények (%): C = 68,83, H = 8,32. Molékulatömeg: 626 (elektronbombázásos tömegspektrum alapján: a továbbiakban is ez a módszer kerül alkalmazásra). Összegképlet: Fajlagos forgatóképesség: |«|23=* + 104,3“ (c = 1,05, kloroform) (a nátrium D-vonalára vonatkoztatva itt és a továbbiakban). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 12
