198696. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3(2H)-piridazinon származékok és azokat hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 1986% B 2 300 - 400 g testtömegű hím tengerimalacból izolált légcsövet sodrott szalaggá kikészítünk. A légcső preparátumokat 1 g terheléssel felfüggeszve merítjük 10 ml űrtartalmú szervfürdőbe, amely 5 indometacint tartalmaz és alkalmazás előtt egy órán át inkubáljuk. Összehúzó reak ciót kapunk 2xl0'8 g/ml LTD4 hatására a maximális hisztamin-reakció (ÍO^M) után. A hatóanyagmintákat feloldjuk 100%-os DMSO-ban és hozzáadjuk a szervfürdőkhöz (végkoncentráció 10'6 g/ml 1Ü'7 g/ml) harminc perccel az LTD4 hozzáadása előtt, majd egybevetjük az LTD4 okozta kontrakciói hatást az ellenőrző teszt eredményével, amelyben a sodrott légcsövet úgy vizsgáljuk, hogy hatóanyag nincs jelen. Az LTD4 indukálta kontrakciót a maximális hisztaminreakció értékének százalékában fejezzük ki, majd a következő összefüggés alapján számítjuk az antagonista hatást (Am): Ant (%) = (1,0 — %-os összehúzódás hatóanyag jelenlétében/%-os összehúzódás hatóanyag hiánya esetén) x 100 A technika állásából ismert ellenőrző hatóanyagként alkalmaztuk a FPL-55712. jelű szert (továbbiakban: FPL), amelynek szerkezetét az (FPL) képlet szemlélteti. (VM2) in vivo teszt Hatékonyság endogén módon felszabaduló SRS —A közvetítésével kiváltott analfilaxiás broncho-konstrikcióval szemben passzívan szenzibilizált tengerimalacban. 350 — 400 g testtömegű hím tengerimalacokat a kísérlet előtt egy két nappal passzívan szenzibilizálunk oly módon, hogy a Capple Laboratories által készített nyúl anti-EA(tojás albumin) szérumból 0,125 ml-t befecskendezünk intravénásán (i.v.). Az endogén módon felszabaduló SRS-A által közvetített, antigénindukálta anafilaxiás broncho-konstrukciót Kőzett és Rossler módosított módszerével határozzuk meg (Arch. Exp. Path. Pharmac., 195, 71, 1940). A szenzibiüzált lengerimalacokat 1,5 g/kg-nyi — intraperitoneális — uretán injekcióval altatjuk. A jobboldali nyakérbe kanült vezetünk valamennyi hatóanyag beadása céljából: a légcsőbe kanüll vezetünk a teljes tüdőrezisztencia meghatározása céljából. A tengerimalacokat mesterségesen lélegeztetjük kisméretű állati lélegeztető készülékkel (Shinano, típusjel: SN-480 — 7), amelyet 4,5 ml lökel-térfogatra és percenkénti 50 légzésütemre állítunk. A tüdőrezisztencia változását a Nihon Kohden cég TP —602T típusjelű nyomásadójával mérjük, amelyet a légcsőbe vezeteti kanül T-elágazásához csatolunk. A légáram térfogat növekedését a maximális broncho-konstrukció %-ában fejezzük ki, amely akkor áll fenn, amikor a légcsövet elszorítjuk. A sebészeti előkészítés után az állatokat — a zárójelben megadott adagolással és az EA-próba [0,2 mg/kg] beadását a zárójelben megadott időtartammal megelőzően — előkezeljük indometacinnal [2 mg/kg, 10 perc], pirilaminnal (2 mg/kg, 6 perc], majd propanollal [0,1 mg/kg, 5 percj. Valamennyi hatóanyagmintát orálisan adjuk be két órával az EA-próba beadása előtt. A broncho-konstrikció gátlást (Inb%) a következő összefüggés alapján számítjuk ki: Inh (%) (1,0 — max. konstrikció (%) hatóanyag jelenlétében / max. konstrikció (%) hatóanyag hiánya esetén) x 100. Tesztenként 5-6 állatból álló csoportokat alkalmazunk, a maximális broncho-konstrikció (6 állatra vett átlagolással, átlag ± szórás alakjában kifejezve): 62 ± 6%. (VE) Vizsgálati eredmények (VEI) in vitro teszt A 2. táblázat mutatja a hatóanyagminták által kifejtett LTD4 antagonizmus mértékét 10'6 g/ml adagok alkalmazása esetén [a zárójelben adott értékek a 10'7 g/ml koncentrációval kapott eredmények). 2. táblázat Vegyület sz. Ant. (%) 96 44 97 82 98 100 99 100 100 100 101 100 102 100 103 100 104 65 5 54 7 50 10 66 22 59 23 51 27 72 30 38 33 93 36 70 45 50 46 73 47 79 48 99 50 95 51 94 52 100 53 100 54 95 55 81 56 100(51) 57 100(37) 58 100(40) 60 100(38) 61 96 63 92 64 90 65 % 66 100(48) 67 100(82) 68 92 69 100(83) 70 66 71 66 72 75 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 11
