198669. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kinon származékok hatóanyagként e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 Az elegyet 4 °C-on 30 percen át állni hagyjuk, 10 percen át 3000 fordulat/perc sebességgel centrifugáljuk, majd a felülúszót bepárlással koncentráljuk. A maradékot 0,5 ml sóoldatban oldjuk. A képződött SRS— - A mennyiségét biológiai módszerrel határozzuk meg, tengerimalac ileumot használva. Az eredményeket a 10a. és 10b. táblázatban ismertetjük. 10a. táblázat Ér-permeabilitásra kifejtett hatás patkányon, visszatérő passzív Arthus mellhártyagyulladás korai szakaszában VegyÜlet száma Dózis (mg/patkány) Gátlás (%) 50. 0,1 1 47** 93. 0,1 1 14 43 P < 0,01, a kontroll csoportokhoz viszonyítva. 10b. táblázat Patkány mell üreg-váladék az SRS—A képződésének gátlása, visszatérő passzív Arthus mellhártyagyulladás korai szakaszában Vegyület száma Dózis (mg/patkány) Gátlás (%) 50. 0,1 1 93. 0,1 1 ” 56** **: P < 0,01, a kontroll csoportokhoz viszonyítva 11. kísérleti példa Szuperoxid (Oj ) képződésére kifejtett hatás tengerimalac peritoneális makrofágjaiban 400-450 g súlyú hím Hartley tengerimalacoknak intraperitoneálisan 5 ml cseppfolyós paraffint adunk. Négy nap múlva a peritoneális sejtek összegyűjtésére a hasüregbe 15 ml Hank-féle puffert adagolunk. A peritoneális sejtekben lévő makrofágokat Wood P. R. [J. Immunol. Methods 28,117—124 (1979)] módszere szerint tisztítjuk. A makrofágok tisztasáp 95%-nál nagyobb. A reakdóelegy 75 pl makrofágot (1 x 107 sejt/ml), 5 pl luminolt, 10 jid forbol-rrdrisztát-acetont és 10 pl hatóanyagot tartalmaz, 100 fű vértérfogatban. Az Oj képződést kemilumineszcenciás vizsgálattal határozzuk meg. A hatóanyagokat 10%-os dimetil-szulfoxid-oldatban oldjuk. A vizsgálati eredményeket a 11. táblázatban ismertetjük. 11.táblázat Ol képződés gátlása tengerimalac peritoneális makrofágokban (kísérletek száma: 3) Vegyület száma Koncentráció (mól/1) Gátlás (%) 93. 10* 9± 6 10* 33±12 10* 91± 3 50. 10* 16+ 6 10* 38± 3 10* 88± 2 dl-a-tokoferol 5 10* 3± 2 10* 11± 6 12. kísérleti példa Anafilaxis lassan reagáló anyagának (SRS-A) képződésére kifejtett hatás patkány hasüregben A patkány hasüregben az SRS- A képződésének mértékét Orange és munkatársai [J. Immunoi. 105, 1087- 1095 (1970)] módszere szerint határozzuk meg. Patkány anti-tojásalbumin-antiszérumot sóoldattal kétszeresére hígítunk, és a hígított oldatból 2 ml adagolunk patkányoknak, intraperitoneálisan. Két óra múlva intraperitoneálisan 2 mg tojásalbumint adagolunk az állatoknak, 5 ml, 50 pl/ml heparint és 0,1% zselatint tartalmazó lyrode-oldatban. Az antigén-provokálás után 15 perccel az állatokat elvéreztetéssel leöljük, éteres altatás mellett, és a hasüregbe adagolt oldatot összegyűjtjük. Az oldatot 900 g-vel 5 percen át centrifugáljuk. A felülúszó 2 ml-ét 7 ml hideg abszolút etanollal elegyítjük, és az elegyet 4 °C-on 30 percen át állni hagyjuk. Az elegyet 1500 g-vel 10 percen át centrifugáljuk, majd a felülúszót bepároljuk. A maradékot 1 ml sóoldatban oldjuk. Az SRS- A mennyiségét biológiai módszerrel Határozzuk meg, tengerimalac ileumot használva. Az 1%-os dimetil-szulfoxidban oldott hatóanyagokat az antigén-provokálás előtt 1 perccel intraperitoneálisan adagoljuk az állatoknak. A vizsgálati eredményeket a 12. táblázatban ismertetjük. 198.669 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 28
