198669. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kinon származékok hatóanyagként e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 34. példa Gyógyszerkészítmények előállítása A) Kapszula előállítása ti) 93. vegyidet 50 mg (2) cellulóz (finom por) 30 mg (3) laktóz 37 mg (4) magnézium-sztearát 3 mg összesen: 120 mg A komponenseket összekeverjük és zselatin kapszulába töltjük. B) Lágy kapszula előállítása (1) 22. vegyület 50 mg (2) kukoricakeményítő olaj 100 mg összesen: 150 mg Az (1) és (2) komponenst összekeverjük és a kapott oldatot a szokásos módon lágy kapszulába töltjük. C) Tabletta előállítása (1150. vegyület 50 mg (2) laktóz 34 mg (3) kukoricakeményítő 10,6 mg (4) zselatinált kukoricakeményítő 5 mg (5) magnézium-sztearát 0,4 mg (6) kaldum-karboxi-metil-cellulóz 20 mg összesen: 120 mg A komponenseket összekeverjük és tablettázógépen a szokásos módon tablettává préseljük. 1. kísérleti példa 5-Iipoxigenáz-inhibitor aktivitás meghatározása 10 107 RBL-1 sejtet (patkány bazofil leukémia sejt) 0,5 ml MCM-ben (hízósejt közeg) szuszpendálunk és a vizsgálandó oldat hozzáadása után - amely 0,5 ml MCM-ből, 50 Mg arachidonsavból, 10 pg A-23187-ből (kalcium-ionofor, Eli Lilly) és 0,1 pmól/l, 0,01 pmól/ ß, illetve 0,001 ^rmól/1 végkoncentrációjú vizsgálandó kinonszármazékból áll - a reakdóelegyet 37 °C-on 20 percen át inkubáljuk. A reakdó lejátszódása után a reakdóelegyhez 4 ml etanolt és belső referenda-hatóanyagként 1,4-dimetoxi-2-metil-3-(3-metoxi-propil)-naftalint adunk a reakdóelegyhez, az elegyet alaposan összerázzuk és szobahőmérsékleten 10 percen át állni hagyjuk. Ezután 2000 fordulat/perc sebességgel 10 percen át centrifugáljuk, a felülúszó folyadékot elválasztjuk és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A koncentrátumhoz 0,5 ml 60%-os vizes metanolt adunk, és a kapott oldat 100 pil-ét nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárásnak vetjük alá, az 5-HETE (5-hidroxi-ejkozatetraénsav) mennyiségének meghatározása céljából. Az 5-HETE mennyiségét 237 nm-en az ultraibolya fényabszorpdó intésével határozzuk meg. Az 5-HETE képződésének gátlását (IE) az alábbi egyenlet segítségével számítjuk ki: IE = (1 -|)xl00, a képletben „a” jelentése a kinonszármazék távollétében mért csúcs-magasság vagy csúcs-terület, amely a belső referenda-hatóanyag csúcsértékével van korrigálva. „b” jelentése a kinonszármazék jelenlétében mért csúcs-magasság vagy csúcs-terület, amely a belső referenda-hatóanyag csúcsértékével ban korrigálva A kísérleti eredményeket a 2. táblázatban ismertetetjük. A táblázat adataiból látható, hogy a találmány szerinti eljárással előállított kinonszármazékok jelentősen gátolják az 5-HETE képződését. 2.táblázat 5-HETE képződésének gátlása Vegyület 5-HETE képzőszáma (lésének gátlása (IC50, 10‘8 mól/1 )* Vegyület száma 5-HETE képződésének gátlása (ICjo.10 * mól A) 1. 8 17. 20 3. 6 18. 20 5. 3 23. 1,0 6. 2,8 35. 44 7. 14 36. 32 9. 3,2 39. 130 10. 3,4 45. 2,8 11. 3,4 46. 73 13. 8 50. 2,8 14. 20 56. 6,2 15. 5 87. 10 16. 3,2 93. 9 * az 5-HETE képződést gátló hatást (105n) azzal a hatóanyag-koncentrádóval jellemezzük (10* mól/1), amely jelenlétében az 5-HETE csúcs-magasságának vagy csúcs-területének 50%-os csökkenése észlelhető a nagynyomású folyadék-kromatogrammon. 2. kísérleti példa lmmunoglobulin-G, -mediálta hörgőösszehúzódási reakdóra gyakorolt hatás, tengerimalacon A vizsgálatot Orange és Moore (J. Immunoi. 116, 392-397, (1976)] módszere szerint végezzük. Hím és nőstény, átlagosan 350 g súlyú Hartley tengerimalacokat 1 mg tojás-albumint és Freund-féle komplett adjuvánst (Wako Pure-Chemical industries, Ltd., Japán) tartalmazó 1 ml emulzió intraperitoneális adagolásával érzékenyítünk. Az érzékenyítés után 3 héttel a tengerimalacok szérum-antitest-szintjét a tengerimalacok 3 órás passzív bőr-anafilaxis reakdójának (PCA-reakdó) segítségével mérjük. Érzékennyé tett állatként azokat a tengerimalacokat használjuk, amelyek 1000-szeresére hígított szérummal pozi; tív PCA-reakdót mutatnak. Az antigén-antitest reakdó következtében létrejött hörgőösszehúzódási reakdót Konzett és Rössler [Naunyn-Schmiedeberg's s Arch. exp. Path. Pharmak., 195 , 71-74, (1940)] módszere módszere szerint mérjük. A tengerimalacokat uretános altatás mellett (1,5 g/kg i.p. dózis) hanyattfektetve rögzítjük. A légcsövet bemetsszük és mesterséges lélegeztető készülékkel (Harvard Co. gyártmánya) kötjük össze a légcsőbe vezetett csövön keresztül, a fenti cső elágazását pedig egy hörgőösszehúzódást átalakító készülékhez (7020 típus, gyártja az Ugobasile Co.) csatlakoztatjuk. Alégzésen-198.669 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 24
