198627. lajstromszámú szabadalom • Eljárás granulocita telepstimuláló faktort tartalmazó stabil gyógyászati készítmény előállítására
7 HU 198627 B 8 az orális beadásra szántak, mint tabletták, labdacsok, kapszulák, granulátumok és szuszpenziók; oldatok, szuszpenziók és fagyasztva szárított készítmények, elsősorban intravénás injekciókhoz, szubkulán injekciókhoz és intrakutan injekciókhoz szántak, és a nyálkahártyán keresztüli beadáshoz szántak, mint a végbélkúpok, nazális gyógyszerek, és hüvelykúpok. A jelen találmány szerint legalább egy anyagot adunk a G-CSF-et tartalmazó gyógyászati készítményhez az alábbiak közül: felületaktív anyagok, szacharidok, fehérjék, vagy nagy molekulatömegű anyagok, ilyen módon akadályozzuk meg, hogy a készítmény adszorbeálódjék tárolóedényének falóhoz vagy a fecskendő falához, ugyanakkor a készítmény stabil maradjon hosszabb időtartamon át. A részletes mechanizmus, amellyel a fentebb említett anyagok stabilizálják a G-CSF-et, vagy megakadályozzák, hogy adszorbeólódjék, még nem tisztázott. A G-CSF felszínét, amely hidrofób fehérje, a felületaktív anyagok beborítják és szolubilizólják így megakadályozzák még a nyomnyi mennyiségben jelen levő G-CSF-et is, hogy tórolóedényének vagy a fecskendőnek a felületéhez adszorbeálódjék. A szacharidok vagy hidrofil, nagy molekulatömegű anyagok hidratált réteget alkothatnak a G-CSF és tárolóedénye vagy a fecskendő falának adszorptív felülete között, ilyen módon akadályozva meg a G-CSF adszorpcióját. A fehérjék versenghetnek a G-CSF-fel a tárolóedény vagy fecskendő falának adszorpciójáért, ilyen módon gátolva a G-CSF adszorpcióját. A G-CSF adszorpciójának megakadályozásán kivül a fentebb említett anyagok részt vehetnek a G-CSF molekulák összekapcsolódásának vagy polimerizációjának megakadályozásában is. Felületaktív anyagok, szacharidok, fehérjék vagy nagy molekulatömegű vegyületek jelenlétében az egyes G-CSF molekulák diszpergálódnak ezekben az anyagokban, és a G-CSF molekulák közti kölcsönhatás megfelelően csökken, így csökken ezek összekapcsolódásának vagy polimerizációjának valószínűsége. Ezen kívül ezek az anyagok gátolhatják a G-CSF autooxidációját, amely magas hőmérsékleten és nedvességtartalomnál felgyorsul, és megakadályozzák, hogy a G-CSF összekapcsolódjék vagy polimerizólódjék autooxidációja eredményeképpen. A G-CSF autooxidációjának, összekapcsolódásának és polimerizációjának gátlása tovább fokozható valamely aminosav, kéntartalmú redukálószer vagy autooxidóns hozzáadásával. A fentebb leirt problémák főleg injekciókhoz való oldatok és szuszpenziók esetén lépnek fel, de előfordulnak a G-CSF kiszerelésének olyan eljárásai során is, amikor más adagolási formáról, pl. tablettákról van szó. Felületaktív anyagok, szacharidok, fehérjék vagy nagy molekulatömegű anyagok hozzáadása hatásos ez utóbbi esetben íb. Felületaktív anyagok, szacharidok, fehérjék és nagy molekulatömegű anyagok, legalább egyikének az adagolása révén a G-CSF nagy mértékben stabilizálódik, és aktivitása meghosszabbított időtartamon át fennmarad, amint ezt a későbbi példák mutatják. Hogy ezeket az eredményeket elérjük, ezen anyagok mindegyikének mennyisége, különösen alsó határén kritikus, és a következő tartományok kívánatosak: 1-10 000 tömegrész felületaktív anyag, 1- 10 000 tömegrész szacharid, 1-20 000 tömegrész fehérje és 1—20 000 tömegrész nagy molekulatömegű anyag, 1 tömegrész GCSF-re vonatkoztatva. A jelen találmány szerint a felületaktív anyagokat, szacharidokat, fehérjéket és/vagy nagy molekulatömegű anyagokat meghatározott koncentrációban alkalmazzuk, és ez hatásos nemcsak annak megakadályozásában, hogy a G-CSF tárolóedényének vagy egy fecskendőnek a falára adszorbeálódjék, hanem abban is, hogy a G-CSF-et tartalmazó gyógyászati készítmény stabilitása növekedjék. Ennek eredményeképpen lehetővé válik kicsiny, de nagyon pontos G-CSF adag beadásának biztosítása; mivel a G-CSF költséges anyag, hatékony felhasználása kisebb költségeket eredményez a G-CSF-et tartalmazó gyógyászati készítmények előállításánál. A következő példákat abból a célból ismertetjük, hogy pontosabban bemutassuk a jelen találmányt, de ezeknek nem az a célja, hogy korlátozzák a találmány oltalmi körét. Ezekben a pédákban a G-CSF maradék aktivitását az alábbi módszerek egyikével határozzuk meg. (a) Egér csontvelő-sejteket alkalmazó lágy agar módszer Lószéruraot (0,4 ml), 0,1 ml mintát, 0,1 ml C3H/He (nőstény) egér csontvelő-sejt szuszpenziót (0,5-1.105 magos sejt), és 0,4 ml módosított McCoy-5A tenyésztő oldatot, amely 0,75% agart is tartalmaz, összekeverünk, szövettenyésztésre szolgáló műanyag csészébe (35 mmCO öntjük, koaguláljuk, és 5 napon ót tenyésztjük 37 °C hőmérsékleten 5% CÜ2/95% levegő atmoszférában, 100% nedvességtartalomnál. A képződött telepek számát megszámoljuk (egy telep legalább 50 sejtet tartalmaz), és az aktivitást meghatározzuk oly módon, hogy egy egységnek tekintjük azt az aktivitást, amely egy telepet képez. Az (a) módszerben alkalmazott módosított McCoy 5A tenyésztő oldatot a következő eljárásssal állítjuk elő. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 no f>5 6
