198476. lajstromszámú szabadalom • Eljárás piperidin származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 198476 B 2 A vegyület száma n R R’ Rt Táblázat R2 R3 R4 Op.: CC) Só 1. 2 H H OH H H H 76 * 2. 2 H H OH H H OH 240-243 fumarát 3. 2 H H OH H-CH3 OH 163-165-4. 2 H H OH H-CH3 H 211-212 HC1 5. 2 H H kötés-ch 3 OH 177-180-6. 2 H H kötés-ch 3 H 98-100-7. 2 F 4-F OH H-ch3 OH 166-167-8. 2 F 4-F OH H-ch3 H 170-173-9. 2 F 4-F kötés-ch 3 H 187-189 fumarát 10. 2 F 4-F kötés-ch 3 OH 164-165-11. 2 F 4-F H H-CH3 OH 190-192 oxalát 12. 2 F 4-F H H-CH3 H 222-225 HC1 13. 2 F 4-F H H H H 161-163 fumarát 14. 2 F 4-F H H H OH 234-235 HC1 15. 2 F 3-F OH H-CH3 OH 123-125-16. 2 F 3-F kötés-CH3 OH 114-116-17. 3 F 4-F OH H-CH3 H 206-207 oxalát 18. 3 F 4-F kötés-ch 3 H 171-172 fumarát 19. 3 F 4-F kötés-ch 3 OH 211-213 fumarát 20. 3 F 4-F OH H-ch3 OH 144-146-21. 4 F 4-F kötés-ch 3 OH 124-126-A találmány szerinti vegyületek antiszerotonin hatásúak, (az 5-HT2 receptorok szintjén). Ezt a hatást specifikusan a szterotoninerg receptorokhoz kötődő ligandumok kiszorítási vizsgálatával mutattuk ki „in vitro,, (SBS) és „in vivo,, pedig perifériás szinten a szerotoninnal előidézett ödémára (OES) és centrális hatását pedig az L-5-hidroxi-triptofánnal előidézett fejrángásra (head-twitches) gya- 35 korolt antagonista effektussal (AHT) határoztuk meg. SBS teszt A találmány szerinti vegyületekkel patkányagykéreg szerotoninert receptoraihoz (5-HT2) kötődő (binding) spiroperidolnak a kiszorítását vizsgáltuk. A patkányagyat kivettük, az agykérget lefejtettük és O'C-on literenként 7,4 pH-ju 5 mmól trisz-HClpuffert, 120 mmól nátrium-kloridot és 5 mmól kálium-kloridot tartalmazó elegyben homogenizáltuk. A homogén elegyet 10 percen át centrifugáltuk (40000 45 x g) és ezt kétszer ismételtük meg, az üledéket ismét a fenti pufferelegybe helyeztük, homogenizáltuk és centrifugáltuk. Az utoljára nyert üledéket a puffereleggyel hígítottuk úgy, hogy 1 ml pufferelegy 100 mg szövetet tartalmazott. A szövetet ezt követően 10 percen át, 37 ‘C-on literenként 10 [imól pargylin (N-metil-N-propin-2-ilbenzil-amin) jelenlétében inkubáltuk, majd 20 percen át, 37 ‘C-on literenként 0,3 mmól 3H-val jelzett spiroperidol (specifikus aktivitása: 25,6 Ci/mmól), valamint literenként, kiindulva 0,0001 jamól és 100 pmól-ig terjedő koncentrációjú vizsgálandó vegyület jelenlétében inkubáltuk. Ebből azonos térfogatú, 1 ml-es mennyiséget vákuumban szűrtünk, a szűrletet kétszer 5-5 ml hideg 60 pufferoldattal mostuk és szárítottuk. A radioaktivitást toluolban mértük, literenként 5 g 2,5-difenil-oxazol (PPO) és 0,1 g l,4-bisz(5-fenil-2-oxazolil)-benzol (POPOP) jelenlétében. A vegyület aktivitását úgy értékeltük ki, hogy a 3H-val jelzett spiroperidol specifikus kötődése gátlásának százalékát görbével ábrázoltuk a kiszorító (vizsgált) vegyület koncentrációjának függ- 30 vényében. Grafikusan határoztuk meg az IC50 értékét, vagyis azt a koncentrációt, amely a specifikus kötődés 50 %-át gátolja. A specifikus kötődést úgy határoztuk meg, mint az 5-MT-n 100 (imól/1 által kiszorított kötődés. A találmány szerinti vegyületek nagyobb részének IC50 koncentrációja literenként 1 és 50 nmól közötti. OES teszt A találmány szerinti vegyületek antiszerotoninerg hatását a patkányokon szerotoninnal előidézett ödé- 40 mára gyakorolt hatásával mutattuk ki, Maiing és munkatársai által a J.Pharmacol. Exp.Ther.-ban [191 (2), 300-310 (1974)] ismertetett módszere szerint. 120 és 150 g súly közötti, CD (Ch.River, Franciaország) törzshöz tartozó, 18 órán át éheztetett hímpatkányokat szétosztottunk randomizált csoportokba. A vizsgálandó vegyületek 1 %-os oldatát vagy Tween 80^-rel készített 1 %-os szuszpenzióját orálisan adagoltuk 0,5 ml-t 100 testsúly g-ra, 1 órával a 50 patkányok hátsó lábának talperébe fecskendezett 1 [tg szerotonininjekciója előtt, (sterilezett, fiziológiás oldatban, 0,1 ml-nél kisebb térfogat). Az ödéma térfogatát a szerotonin beadása után 1 órával Ugo Basile-féle higanyos pletizmométerrel mértük. A ED40 55 értékét (azt az adagot, amely az ödéma volumenét 40 %-kal csökkentette, a nem kezelt, kontrollállatokkal összehasonlítva) grafikusan határoztuk meg. A találmány szerinti vegyületek ED40 értéke orálisan meghatározva 0,1 mg/kg és 2 mg/kg közötti. AHT teszt A vegyületek antiszerotoniner aktivitását egerek L-5-hidroxi-triptofánnal (L-5-HTP) előidézett fejrángására (head-twitches) gyakorolt antagonista hatásával vizsgáltuk, amely módszert Come és munkatársai a 65 Br. J. Pharmacol-ban [20, 106-120 (1962)] írtak be. 4
