198264. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antitrombotikus gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 ammónium-acetát oldatban (pH= 4) egyaránt több héten át stabil. Szobahőmérsékleten (kb. 22 °C) a találmány szerinti eljárással nyert készítmények több héten át stabilak. Amennyiben hosszabb tárolási idő szükséges, a tPA-t alkalmas hordozóanyagban kell liofilizálni, majd felhasználásra alkalmas formára hozni (a találmány szerinti egységdózis formájában) a közvetlen felhasználáshoz. A fenti eredményeket szérum jelenlétében tenyésztett rekombináns Chinese hamster ovary (CI10) sejtekből nyert tPA-val végeztük, de a találmány szerinti egységdózisok előállításához, más forrásból nyert, így például szérumból, melanoma sejtekből, szérum-független emlős-sejtekből, baktériumokból, élesztőből, rovar sejtekből, növényi sejtekből vagy egyéb emlős sejtekből (natív és rekombináns sejtekből egyaránt) nyert tPA is alkalmazható. A találmány szerinti készítmények előállításához más tPA formák is alkalmazhatók, így például egy-láncú tPA. tPA-variánsok, így peidául olyan tPA-analógok, amelyekben egy vagy több aminosav ki van cserélve anélkül, hogy ez az oldhatóságra, stabilitásra vagy a hatásra bárminemű kihatással lenne, továbbá olyan tPA, amelyben a glükozil-csoport módosítva van. A találmány szerint előállított egységdózisban az ammónium-acctáton kívül, más gyógyászatiig elfogadható pufferanyag is alkalmazható, így például a következő savak és azok sóinak keveréke: ecetsav, adipinsav, citromsav, tejsav, borkősav, aszparginsav, vagy glutaminsav, továbbá az alábbi savak: glutársav, maleinsav, fumársav, borostyánkősav, pimelinsav, béta-alanin vagy enol piruvinsav. Előnyös anion az acetát és előnyös kation a nátrium és ammonium. A találmány szerint előállított egységdózisokban a puffer koncentrációját úgy választjuk meg, hogy a kívánt 3,5—5,5-es, előnyösen 4,0-5,0-ös, még előnyösebben a 4,4 4,8-es pH tartományt fenntarthassuk. Általában 10-200 mmól, előnyösen 20-100 mmól koncentrációt alkalmazunk a megfelelő sav nátrium- vagy ammóniumsójából. A puffereket ismert eljárások szerint állítjuk elő, például oly módon, hogy nátrium-hidroxidot adagolunk 100 mmólos vizes ecetsavhoz a kívánt pH-tartomány eléréséig akkor, ha például 100 mmólos nátrium-acetátot kívánunk alkalmazni. A találmány szerint előállított készítmények előnyösen vizes oldatok, bár bizonyos vízzel elegyedő poláris nem-vizes oldószerek is alkalmazhatók, azzal a feltétellel, hogy a tPA aktivitását és stabilitását jelentősen nem befolyásolják. A találmány szerinti eljárással előállított egységdózis készítmények a pufferen és a tPA hatóanyagon kívül kis mennyiségben még egyéb, a parenterális készítményekben alkalmazott adalékokat, így például konzerválószereket, például timerosalt, klórbutanolt vagy metilparabent, továbbá a tonicitás beállításához alkalmas szereket, például nátrium-kloridot, dextrózt vagy mannitot is tartalmazhatnak. A találmány szerinti egységdózis előnyösen izotóniás (250—310 mOsm/kg). A Wang és mtársai által ismertetett adalékanyagok szintén alkalmazhatók (J. Parenteral Drug Assoc. 34, /1980/ 452) és a készítmények tartalmazhatnak még további ismert hatóanyagokat, így például fibrinolitikus, kardiotoniás, antiarrltmiás vagy hipotenzív anyagokat is. A tPA-t tartalmazó találmány szerinti egységdózis készítmények stabilitását még tovább fokozhatjuk, ha hidrofil tulajdonságú, hideg ellen védő polimer anyagot is adagolunk, amely célra például a hidroxi-alkil-cellulóz, zselatin, akácmézga, poli(vinil-pirrolidon) (pl. 10.000 és 60.000 mólsúly között), valamint polialkilénglikolok, például polietilénglikol (pl. 4.000 és 40.000 mólsúly közötti) alkalmas. Ezen anyagok növelik a stabilitást az oldatban, azaz minimalizálják az aktivitás-csökkenést és a fehérje degradációt a liofilizáhís során, valanánt a liofilizálás után a felhasználásra való felkészítésnél (a továbbiakban előkészítés). Erre a célra előnyös a 20.000 és 50.000 közötti mólsúlyú poli(vinil-pirrolidon) (PVP). A fenti anyagokat a tPA készítményekhez oldat formájában vagy poralakban adagolhatjuk. Előnyösen úgy járunk el, hogy a liofilizálás előtt adagoljuk olyan mennyiségben, hogy a végső felhasználásra kerülő készítményben a biztonságos és hatásos mennyiségben legyen jelen. Ez a mennyiség általában 40.000 mólsúlyú PVP-ból (Plasdone C-30) 1 15, előnyösen 4—10 mg 1 mg tPA-ra számolva. Zselatin esetében ennél nagyobb mennyiségre van szükség, így például 10-1000 mg-ra 1 mg tPA-ra számolva. A találmány szerinti egységdózis készítmény 0,1 — —15 mg/ml, előnyösen 0,5-10 mg/ml tPA-t tartalnjaz és előállítását ismert eljárások szerint végezzük. Így például úgy, hogy a liofilizált tPa-t alkalmas pufferral keverjük el, az oldatban lévő tPA-t alkalmas pufferral dializáljuk vagy a tPA oldat pH-ját savas vagy só-pufferral beállítjuk. Ennek megfelelően, a találmány szerinti egységdózis készítmények magukban foglalják az olyan készítményeket, amelyeket liofilizáltunk, majd vizes oldat formájában előkészítettünk, és ily módon oldat-formájú egységdózist nyertünk. Előnyösen a tPA tisztításának utolsó lépését alkalmas pufferban, 3,5-5,5 közötti pH értéken végezzük. A találmány szerinti egységdózis készítményeket előnyösen parenterális, különösen intravénás, intrakoronáriás vagy intraarteriális adagolásra alkalmas formában készítjük. A készítmények tPA tartalma, valamint a készítmény térfogata függ a megbetegedés mértékétől. Az optimális koncentráció megállapítása az orvosi gyakorlat feladata. Akut myokardiális infarktus (Ml) esetén a betegnek általában 25-200 mg, előnyösen 70—150 mg mennyiséget adagolunk 30—90 percen keresztül. Collen és mtársai közleménye szerint (Circulation, 70 /1984/, 1012) Ml-ban szenvedő betegeknek intravénás infúzió formájában 0,5-0,75 mg/kg dózist adagoltak (35—53 mg/70 kg) 30—120 percen keresztül és a felhasznált készítmény 10 ml-es, 0,5 mg/ml tPA-t tartalmazó ampulla volt. Sobel és mtársai (Circulation, 69, /1984/ 983) 200—400 1U (International Unit) mennyiségben alkalmazták a tPA-t infúzió formájában Ml-ban szenvedő betegeknél. Van der Werf és mtársai (N. Engl. J. Med., 130, /198/ 609) intravénás (i.v.) és intrakoronáriás (i.c.) módon 3x10s 1U/15 perc (i.v.) és 1,4x10* IU/35 perc (i.c.) mennyiségben adagolták a tPA-t Ml-ban szenvedő betegeknek. Robinson közleménye szerint (84-01786. számú PCT közzétételi irat) 0,1 — —1,0 mg/kg mennyiségben infúziósán, 8 napon át' alkalmaztak módosított tPA-t, amelyben a szénhidrát alkotóinak legalább egy része hiányzott, közepes mértékű trombózis kezelésére. Akut MI kezelésére a találmány szerinti egységdózist általában bolus vagy injekciós formájában. 198.26-4 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
