198264. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antitrombotikus gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 198 264 ecetsav/ammónium-acetát — hacsak másképpen nem jelöljük oldatban. Felismertük, hogy a tPA oldhatósága jelentősen megnövelhető szolubilizáló és stabilizáló szer alkalmazása nélkül, ha az oldást puffer jelenlétében, 3,5-5,5 pH tartományban végezzük. így például pH= 4-nél (0,1 mólos ammónium acetátban) a tPA oldhatósága nagyobb, mint 15 mg/ml, pH- 5-ncl (0,1 mólos ammónium-acetát) az oldhatóság kb. 3 mg/ml, szemben az előzőekben említett pH- 7-nél mutatott 0,1 mg/ml-es oldhatósággal. A találmány szerinti eljárással előállított készít inényekben a tPA oldhatósága 4,0-es pH-értéknél azonos a 2 mólos karbamid jelenlétében pH- 7,5 -nél mutatott oldhatósággal. A találmány szerinti készítményekben azonban ilyen stabilizáló szer alkalmazása, amely ozmotikus diuretikum és tPA jelenlétében káros mellékhatásokat okoz, nem szükséges. A találmány szerinti eljárással előállított készítmé- 5 nyék másik jelentős előnye, hogy az említett pH tartományban a tPA igen nagy stabilitású és ez a stabilitás alacsonyabb és magasabb koncentrációk esetében egyaránt fennáll. A következő 1. táblázatban összefoglaljuk a tPA 7?-os aktivitásának értékeit (0,39 n mg/ml vagy ettől eltérő, külön jelölt koncentráció ' 0 értékeknél) 40”-on karbamidban (2 mólos karbamid, 0,3 mól nátrium-klorid, 20 minői trisz-sósav és 0,01 % Tween®80, pH 7,5) vagy 100 mmól ammónium•acetátban pH- 3,5 5,5 között, a meghatározást S 2251 vizsgálattal végezve (Weinberg és mtársai, lg Immunoi. Metli., /1984/, 289). A magasabb hőmérsékletet az aktivitás-csökkenés meggyorsítása érdé kében alkalmaztuk. 20 1 Táblázat Napok pHKarbamid 7,5* 7,5 3,5 4.0 Ammónium-acetát 4,5 5,0 5,5 4,0 0 100 100 100 100 100 100 100 100 1 67 88 65 2 51 84 84 80 94 92 3 19 24 71 90 77 90 84 4 13 66 5 24 , 6 20-7 2 53 62 81 82 65 8 9 4 9 63 62 81 62 72 10 4 11 37 37 56 82 69 69 52 12 13 18 14 34 40 70 62 60 15 17 23 16 22 16 53 58 24 18 15 9 63 55 * 1,3 mg/ml **9,8 mg/ml A fenti táblázat szerinti értékeket ábrázoltuk grafikusan az 1 ábrán. Az eredmények konzisztensek a 100 mmólos acetát oldatban tárolt tPA elektrofore tikus analízis adataival. 3 hetes periódus alatt 40 °C- on a 100 mmólos ammónlum-acctát pufferban 4,0, 4,5, 5,0 és 5,5 pH értéknél tPA degradáció nem volt .kimutatható a poliakrilamid-gél elektroforézissel. Kisebb, a 12, 16 és 21 kilódalton értékeknek megfelelő sávok 3 hét után jelentek meg 40 °C-on, pH- 3,5-ös értéknél. További nagy előnye a találmány szerinti eljárással nyert készítményeknek, hogy bár a tPA 7-es pH érték alatt nagymértékben inaktív, az aktivitás vi$zgQ szaáll a pH 7-es értéknek megfelelő környezetben így például, ha a kezelendő betegnél a beadagolás után a találmány szerinti egységdózis pH- 7-es környezetbe kerül, a tPA aktívvá válik. A találmány szerinti eljárással nyert egységdózis stabilitása alacsony hőmérsékleten nő, így előnyös, 55 ha a tárolását szobahőmérsékletnél, előnyösen 20— —25 °C-nál nem magasabb hőmérsékleten végezzük. Ez a találmány szerinti eljárással előállított készítmények igen nagy előnye, bár a stabilitás alacsonyabb hőmérsékleten,,így például 0 és 15 °C közötti értéken nagyobb. így például 4 °C hőmérsékleten a tPA 60 2 mólos karbamid oldatban (pH- 7) és 100 mmólos 3
