198220. lajstromszámú szabadalom • Eljárás S-184 heteropoliszacharid előállítására
3 HU 198220 B 4 ható, előnyösebb a fermentációt szubmerz viszonyok között folytatni. Kis méretekben a fermentációt előnyösen úgy végezzük, hogy egy alkalmas tápközeget beoltunk a tenyészettel, majd tenyésztő közegre történő átvitel után a fermentációt 30 °C körüli állandó hőmérsékleten, rázógépen hagyjuk lefolyni néhány napig. A fermentációt sterilezett tápközegen kezdjük, egy vagy több oltóanyagtermelési lépésen keresztül. Az oltóanyag termelési lépésben a tápközeg szén- és nitrogénforrások bármilyen alkalmas kombinációja lehet, előnyős szénforrások azonban a glükóz vagy a hidrolizált keményítő. Az oltóanyagtermeló lombikot állandó hőmérsékletű kamrában, mintegy 30 °C-on 1-2 napig rázatjuk, vagy addig, amíg a növekedés megfelelő, és a kapott tenyészet egy részével vagy egy második oltóanyatermelő lombikot, vagy a termelő közeget oltjuk be. Ha közbülső oltóanyagtermelő lépéseket alkalmazunk, lényegében véve az előbbi módon tenyésztjük azokat, azaz az utolsó oltóanyagtermelési lépés lombikja tartalmának egy részét használjuk a termelő közeg beoltására. A beoltott lombikokat állandó hőmérsékleten néhány napig rázatjuk, és az inkubálás végén a lombikok tartalmát alkalmas alkohollal, például izopropanollal kicsapjuk. Nagy méretekben végzett tenyésztéshez előnyös, ha a fermentációt alkalmas fermentorokban végezzük, amelyek keverővei és levegóztetóvel vannak felszerelve. Megfelelő mód- 5 szer az, ha a tenyésztőközeget a fermentorban állítjuk össze, és 121 °C-ra történő felmelegítéssel sterilezzük. Hűtés után a steril közeget beoltjuk az előzőleg tenyésztett oltóanyaggal, és a fermentációt például 2-4 na- 10 pig folytatjuk, mialatt a tenyésztő közeget keverjük és/vagy levegőztetjük, és a hőmérsékletét kb. 30 °C-on tartjuk. Az S-184 heteropoliszacharid ilyen módon történő előállítása különösen alkalmas nagy mennyiségben 15 történő termelésre. S-184 jelű heteropoliszacharid Az ATCC 53160 sz. mikroorganizmus által termelt heteropoliszacharid 50-80 tömegX 20 szénhidrátból, 12-16 tömegX proteinből és 3,0-4,5 tömegX acilcsoportból (écetsavként számítva) áll, a szénhidrát rész 7-16 tömegX uronsavból és mintegy 1:3:5 mólarányban mannőz, glükóz és galaktóz semleges cukrok- 25 ból áll. Az S-184 heteropoliszacharid összetételének elemzési eredményét az I. táblázatban foglaltuk össze. 30 I. táblázat S-184 heteropoliszacharid összetételének vizsgálati eredménye Vizsgálat Minta jele BD-1842 BD-1827 BD-707 BD-2117 BD-2118 Protein (X) (N x 6,25X) 15,8 12,3 12,6 11,8 12,4 Uronsav (X) (mól. tömeg 176, dekarboxilezés) 15,8 12,3 10,76 9,0 7,1 Acilcsoport (X) (1) (1) (2) (2) (2) (ecetsavként) 3,9 3,1 4,5 3,4 3,6 Piroszőlósav (X) <0,1' <0,1 ^ o 0 o. Semleges cukrok: V (X-os mólarányok) (3) (3) (4) (5) mannóz 12 12 19,4 9,4 (17,9-23,8) (9,3-9,8) glükóz 35,6 35 30,1 29,2 (27,6-31,9) (28,7-29,5) galaktóz 52,4 52,5 50,5 61,4 (48,5-52,1) (61,1-62,0) Megjegyzés: (1)—(5) a következőkben ismertetett analitikai módszereket jelölik. . (1) Az acetilcsoport-tartalmat : úgy hatá(2) A 3,1 és 4,5X közötti acilcBoport-tarroztuk meg, hogy az S-184 polimer 0,2X-os talmat (ecetsavként számítva) enzimes mérésvizes oldatát bázisos hidroxilamin reagenssel, 60 sei határoztuk meg, miután hig bázissal hidmajd savas vas-klorid reagenssel kezeltük, rolizáltuk az O-acetil-kótéseket, és az eredményt kolorimetriásan mértük (S. (3) Az S-184 heteropoliszacharidban levő Hestrin, J. Bioi. Chem. 180, 249-261 /1949/). semleges cukrokat különböző módszerekkel Belső standardként acetil-kolin-kloridot határoztuk meg. Az első módszer szerint 50 használtunk. 65 mg S-184 heteropoliszacharidot 4 óra hosszat 4
