198215. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a TAN-749 antibiotikummal rokon szerkezetű vegyületek előállítására
13 HU 198215 B 14 0,2 mól/1 koncentrációjú sóoldattal mossuk, majd 40 1 0,5-0,8 mól/1 koncentrációjú sóoldattal eluáljuk. A TAN-749B-t és D-t tartalmazó frakció a kromatogram elsó, míg a TAN-749A-t és C-t tartalmazó frakció a második felében jelenik meg. A TAN-749A-t és C-t tartalmazó frakciót aktívszén töltetet használva kromatografáljuk és sómentesitjük. A kapott eluátumot koncentráljuk és liofilizáljuk. 20 g TAN-749A-t kapunk, por formájában, amely kis mennyiségű TAN-749C-t is tartalmaz. A TAN-749B-t és D-t tartalmazó frakció aktivszén töltetet alkalmazva kromatografáljuk és sómentesitjük. A kapott eluátumot 1 liter CM-Sephadex C-25-ön (Na*-típus) kromatografáljuk, az eluálást 0,2 mól/1 koncentrációjú sóoldattal végezzük. A kapott eluátumot koncentráljuk, és a koncentrátumot fordított fázisú nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással tisztítjuk, mozgó fázisként 5% metanolt tartalmazó 0,02 mól/1 koncentrációjú foszforsav-pufferoldatot (pH 3,0) használunk. Két frakciót kapunk, az egyik TAN-749B-t tartalmaz egyedül, míg a másik TAN-749B-t és D-t tartalmaz. A csak TAN-749B-t tartalmazó frakciót CM-Sephadex-en, majd aktivszén tölteten kromatografálva 3,05 g TAN-749B-t kapunk. A TAN-749B-t és D-t tartalmazó frakciót koncentráljuk, majd újra nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárásnak vetjük alá. A kapott, csak TAN-749D-t tartalmazó frakciót koncentráljuk. A koncentrátumot 10 ml IRA-402-vel (Cl'-tipus) töltött oszlopon kromatografáljuk, és vízzel mossuk. A kapott eluátumot és mosófolyadékot aktivszénen kromatografálva sómentesitjük. 15,5 mg TAN-749D-t kapunk. A fent kapott 3 g, kis mennyiségű TAN-749C-t tartalmazó TAN-749A-port CM-Sephadex, Amberlite CG-50 (Rohm és Haas Co., USA), majd aktivszén tölteten kromatografélva növeljük a TAN-749C-tartalmat. A kapott, nagy mennyiségű TAN-749C-t tartalmazó port két egymás utáni nagynyomású folyadékkromatográfiás művelettel tisztítjuk, a fent ismertetett körülmények mellett. 20,2 mg TAN-749C-t kapunk. 3. referenciapélda. 964 mg di(hidrogén-klorid)-só formájában lévő 13. vegyületet 10 ml diraetil-formamidban szuszpendálunk. A szuszpenzióhoz jeges hűtés közben 480 pl trietil-amint, 307 mg szorbinsavat, 369 mg 1-hidroxi-benzotriazolt és 563 mg diciklohexil-karbodiimidet adunk, és a kapott elegyet jeges hűtés mellett 1 órán át keverjük. Az elegyet ezután szobahőmérsékletre melegítjük, és 8 órán át tovább keverjük. A reakcióelegyet szűrjük, a szürletből az oldószert csökkentett nyomáson elpárologtatjuk és 200 ml vizet adunk a maradékhoz. A kapott oldat pH-ját 2,5-re állítjuk, majd kétszer 100 ml etil-acetáttal mossuk. A vizes fázis pH-ját 5,5-re állítjuk, majd koncentráljuk és oszlopkromatográfiásan tisztítjuk, töltetként 50 ml 150- -290 pm szemcseméretű Diaion HP-20-at használunk. A koncentrátumot 200 anl vízzel moB- suk, majd frakcionáltan eluáljuk, az eluálást 100 ml 10% metanolt tartalmazó vízzel, 100 ml 50% metanolt tartalmazó vízzel, és végül 200 ml 50% metanolt tartalmazó 0,005 n hidrogén-klorid-oldattal végezzük. A kapott frakciókat nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással tisztítjuk, mozgó fázisként 50% metanolt tartalmazó 0,01 mól/1 koncentrációjú foszfo’'savoldatot (pH 3) használunk. Az egyetlen csúccsal rendelkező frakciókat egyesítjük és koncentráljuk, majd a kapott koncentrátumot liofilizáljuk. 999 mg, aminocsopor tján terc-butoxi-karbonil-csoporttal védett 3. vegyületet kapunk, hidrogén-klorid-sója formájában. Optikai forgatóképesség: [«C]25d = -27,4 ° (c = 0,50, viz) Elemanalizis eredmények a C20H35N5O5 • HC1 • • 0,5 II2O összegképlet alapján: számított: C = 51,00%, H = 7,92%, N = 14,87%, Cl = 7,53%; talált: C = 50,83%, H = 8,01%, N = 14,71%, Cl = 7,57%. 853 mg, aminocsoportján terc-butoxi-karbonil-csoporttal védett, hi.drogén-klorid-só formájában lévő 3. vegyületet 5 ml trifluor-ecetsavban oldunk, és szobahőmérsékleten 30 percen ét állni hagyjuk. Az oldószert elpárologtatjuk, majd a reakcióelegyet dietil-éterrel kezeljük. 1050 mg anyagot kapunk, por formájában. A port 70 ml vízben old jul, és 40 ml Amberlite IRA-402-vel (Cl'—típus, Rohm és Haas Co., USA) töltött oszlopon folyatjuk ét. Az oszlopot 40 ml vízzel mossuk. A kapott eluátumot és a mosófolyadékot egyesítjük és koncentráljuk, majd a koncentrátumot liofilizáljuk. 725 mg 3. vegyületet kapunk, hidrogén-klorid-sója formájában. A vegyület fizikai-kémiai tulajdonságai alapján azonos a természetes forrásból izolált 3. vegyülettel. 1. példa Közelítőleg 200 mg di(hidrogén-klorid)—só formájában lévő 1. vegyületet 20 ml vízben oldunk, hozzáadunk 0,73 g nétrium-hidrogén-karbonátot és 0,175 ml benzoil-kloridot, majd a reakcióelegyet szobahőmérsékleten keverjük. A benzoil-klorid elfogyása és a reakcióelegy pH-csökkenésének megszűnése után az elegyhez benzoil-kloridot és trietil-amint adagolva a reakcióelegy pH-ját közel 8,3 éltéken tartjuk. Kb. 5 óra múlva a reakcióelegyet kétszer 35 ml etil-acetóttal mossuk, pH-ját 2 n sósavoldattal 2,0-re állítjuk, és háromszor 30 ml etil-acetéttal mossuk. A mosott folyadék pH-ját 3 n né.trium-hidroxidoldattal 6,7-re állítjuk, majd koncentráljuk, és 20 ml, 150-290 pro szemeseméretű Diaion 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
