198183. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tetrahidronaftalin-származékok és ezeket a vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
3 HU 198183 B 4 A) Az anti-keratinizálódó hatást az alábbi módszerrel rhinoegérmodellen határozzuk meg. A rhinoegér bőrére az jellemző, hogy szőrtüszókkel egyaránt érintkező, keratinnal töltött felhám utriculusok és szubkután ciszták vannak jelen. Retinoidok adagolására a felhám túlburjánzáséhoz és az utriculi epitéliás kitüremléséhez vezet. A felhám megvastagodása és az utriculusok nagyságának csökkenése a felhám réteg megváltozott szerkezetének normalizálódásét eredményezi. A rhinoegér bőrére naponta helyileg 0,1 ml/cm2 mennyiségben a teszt-vegyület 3%-os acetonos oldatét három héten ét juttatva, illetve a hatóanyag arachisolajjal képezett oldatát 3 héten át orálisan beadagolva a felhám szignifikáns burjánzása és a keratinnal töltött utriculusok markáns kisebbedése figyelhető meg. B) Kémiailag indukált emlötumorok megelőzésére gyakorolt hatást az alábbi módszerrel határozzuk meg. Nőstény Sprague-Dewley patkányokat ellenőrzött és szabályozott hőmérsékleti és megvilágítási körülmények között tartunk. Az állatok szabadon kapnak ivóvizet és táplálékot. Minden patkánynak 50 napos korban 15 mg dimetil-benz(a)antracén arachisolajjal képezett oldatát adjuk be gyomorszonda segítségével. A teszt-vegyülettel történő kezelést egy nappal a karcinogén anyag beadása után kezdjük meg. A kísérleti állatok testsúlyét feljegyezzük és a tumorokat hetente palpéljuk és tolómércével megmérjük. A térfogatot a D —d2 képlet alapján számítjuk ki, ahol .D‘ a 2 tumor ellipszoid nagyobb és ,d* a kisebb átmérőjét jelenti. A kísérletet 11 hét után befejezzük és kiértékeljük. A kísérletben 30 állatból élló kontrollcsoportot (normál táplálékon tartott kontrollcsoportot) és a két alábbi kezelt csoportot alkalmazzuk: 1) 33 patkány; ezek táplálékába naponta 30 tng/kg teszt-vegyületet keverünk be. 2) 36 patkány; ezek naponta 90 mg/kg teszt-vegyületet tartalmazó tápot kapnak. C) A tumorokra kifejtett hatéBt patkányon transzplantálható kondroszarkómén az alábbi teszt segítségével határozzuk meg. A donor-állat szolid tumorját finoman aprítjuk és foszfát-puffer/nétrium-klorid-oldat elegyben szuszpendéljuk. 0,5 ml 30%-os tumorpépet Albínópatkányokba szubkutáns úton implan tálunk. A transzplantált patkányokat 8-8 állatból álló csoportokba osztjuk. A teszt-vegyületet arachisolajban szuszpendáljuk és nyelőszonda segítségével 24 napon át hetente ötször orálisan adjuk be. A tumorokat a 24. napon kivágjuk és lemérjük. Az eredményeket az alábbi egyenlettel kiszámított C/T hányados segítségével fejezzük ki: kontroli-állatok átlagos tumorsúlya C/T=-------------------------------------------------------kezelt állatok átlagos tumorsúlya D) Az antimetaplasztikus hatást patkányon az alábbi módszerrel határozzuk meg. Mintegy 100 g Lestsúlyú nőstény Holzmann-patkányokat nyolcnapos szoktatési idő után tiogenál-narkózisban ovarektomizélunk és 14 nap eltelte után a' kísérlethez felhasználunk. Minden ketrecbe két-két állatot helyezünk; a patkányok szabadon hozzáférhetnek az analilikailag meghatározott kb. 2000 nemzetközi egység A-vitamint tartalmazó táplálékhoz. A teszt-vegyület orális beadása előtt az állatokat hat egymásután következő napon naponta 1 Mg ösztradiol-benzoát és 250 pg tesztoszteron-propionát 0,1 ml szezámolajjal képezett oldatával szubkután kezeljük. A hormon parenterális beadása a vaginális körzetben tiszta stádium kialakulásához - azaz szkvamőzus metapláziához - vezet. A teszt-vegyület orális beadása után két nappal a reakcióeredményt a vaginális felhámon ismét leolvassuk. Az átlagos hatásos dózis kiszámításához Behrens és Kérber felületi módszerét alkalmazzuk. E) Az (I) általános képletű vegyieteknek a szébum-kiválasztásra kifejtett hatását patkányon az alábbi módszerrel határozzuk meg. Kb. 50-60 g testsúlyú himpatkányokat 21-22 napos korukban kasztrálunk. A műtét után egy héttel a patkányokat tisztitóoldatban lemossuk, a kísérleti időszak előtt kiválasztott szébum eltávolítása céljából. A kontrollcsoport patkányai csak hordozóanyagot kapnak. További patkánycsoport állatainak egyidejűleg 100 pg tesztoszteron-propionétot is beadunk 0,2 ml szezámolajban, patkányonként és naponta. Egy másik csoport patkányainak naponta és patkányonként 100 pg tesztoszteron-propionátot 0,2 ml szezámolajban szubkután és a teszt-vegyületet különböző dózisokban 0,2 ml propilénglikolban orálisan adagoljuk be. A patkányokat 14 napon át kezeljük a fenti módon. A 15. napon a szébumot a bőrfelületról és a szőrzetről eltávolítjuk oly módon, hogy a kísérleti állatok testét meghatározott térfogatú acetonba mártjuk és az állatokat 2 percen át fürdetjük. Az oldószer-fürdő aliquot részét bepároljuk és a szilárd maradékot gravimetriásán meghatározzuk. A szébum-kiválasztás tesztoszteron által stimulált növekedését a teszt-vegyület gátolja. E gátlásnak a csak tesztoszteron-propionáttal kezelt patkányokon mért értékekhez viszonyított nagysága szolgál a hatás mértékéül. Az (I) általános képletű vegyületeket jó- és rosszindulatú neopláziák és pre-rosszindulatú sérülések helyi és szisztémás kezelésére, valamint a fenti behatások szisztémás és helyi megelőzésére alkalmazhatjuk. Az (I) általános képletű vegyületek továbbá akné, psoriasis és fokozott vagy patológiásán elváltozott szarusodással járó más 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 C5 4
