198103. lajstromszámú szabadalom • Enzimes eljárás 3-helyettesített cephalosporinok előállítására
11 198 103 12 3X5 ml etil-acetáttal extraháljuk, majd a kivonathoz feleslegben éteres diazometánt adunk. Ezután az oldatot 10 percig keverjük és utána szárazra pároljuk, majd kromatografáljuk preparatív rétegkromatográílás úton, az eluálást etil-acetát/diklór-metáneleggyel végezzük. Ily módon a cím szerinti vegyületet kapjuk olaj alakjában. TLC (etil-acetát/diklór-metán 1:1 arányú elegye): Rf = 0,8. ‘H-NMR (300MHz,CDC13):8 1,51 [3H. s.(CH3)I, 1,58 (3H, s,CH3), 1,66-1,74 (4H, m, C//2C//2CH2CO), 2,26-2,38 (4H, m, CH2CO), 3,79 (3H, s, OCH3), 4,44 (1H, s, 2-H), 5,55 (1H, d, J=4 Hz, 5-H), 5,73 (1H, dd, J=8,56 Hz, 6-H), 6,14 (1H, d, J=8,5 Hz, 6-H). m/e (deszorpciós kémiai ionizáció): 373 (MH+, 31%), 200 (15%), 174 (100%). 5. előállitásmód 6/3-(5-karboxi-pentán-amido)-2,2-dimctil-penam 3-karbonsav más előállítása 6-APA-val 1) Adipinsav-mono-p-nitro-benzilészter Az 1) vegyületet adipinsavból állítjuk elő olyan módszerrel, amelyet a fenti mono-benzilészter előállításához használtunk azzal az eltéréssel, hogy p-nitro-benzil-bromidot használunk benzil-bromid . helyett. Ily módon a fenti vegyületet a nyersanyag átkristályosítása után 0,5 g mennyiségben kapjuk 9%-os kitermeléssel 2,92 g (20 mmól) adipinsavból. TLC (etil-acetát): Rf=0,5. ‘H-NMR (60 MHz, CDC13): 8 1,65-2,04 (4H, m, CtfnC//2C//2CO), 2,26-2,70 (411, m, ClI2CO), 5,23 (2H, s, O/jAr), 7,52-8,15 (4H, 2XABq, J=9 Hz, Ai-H), 9,85 (1H, bs, C02H). 2) 60-[5-(4-nitro-benziloxi-karbonil)-pentán-amido]-2,2-dimetil-penam-4-karbonsav-4-nitro-benzilészter 172 mg (0,50 mmól) 6-amino-penicillánsav-p-nitrobenzii-észtert feloldunk 10 ml diklór-metánban, és az oldathoz hozzáadunk 124 mg (0,50 mmól) 1-etoxikarbonil-2-etoxi-dihidrokinolint (EEDQ), 140 mg (0,50 mmól) 1) pont szerinti vegyületet és 50 mg vízmentes nátrium-szulfátot. A reakcióclcgyct 24 óra hosszat keveijük közömbös gáz légkörben, és utána szárazra pároljuk. A maradékot 50 ml etil-acetátban oldjuk, az oldatot 25 ml 2 normál hidrogénkloridoldattal mossuk, amelyet 25 ml vizes nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal és 25 ml telített konyhasóoldattal való mosás követ. Ezután az oldatot Na2S04 felett szárítjuk, szűrjük és szárazra pároljuk. A maradékot kromatografáljuk, amelyhez szilícium-dioxidot használunk, az eluálást dietil-éter/diklór-metán-elegygyel végezzük, így a cím szerinti 2) vegyületet kapjuk. ‘H-NMR (300 MHz, CDC13): 8 1,56 (3H. s, CH3), 2,12 (3H,$,CH3), 1,68-1,73 (4H, in, C//2C//2CH2CO), 2,26-2,30 (2H, m, CII2CO), 2,41-2.46 (2H, m, CH2CO), 4,49 (1H, s, 2-H), 5,21 (2H, ca S, CH2Ar), 5,28, 5,29 (2H, ABq, J=13 Hz, CH2Ar), 5,54 (1H, d, J=4 Hz, 5-H), 5,73 (1H. dd, J=9,4 Hz, 6-H) 6,10 (1H, d, J=9 Hz, 6-H), 7,49-7,56 (4H m, Ar-H), 8,21-8,28 (4H,m,Ar-H). m/c (elektronütközés): 614 (M+)A diészter termékről az észtercsoportokat a következő módon eltávolítjuk és így a cím szerinti vegyületet kapjuk: 160 mg (0,17 mmól) fenti diészter 15 ml tetralúdrofuránnai készített oldatához hozzáadunk 29 mg (0,34 mmól) nátrium-liidrogénkarbonátot 15 ml vízben oldva, és 100 mg szénre felvitt 10%-os palládiumot. A reakcióelegyet 1 óra hosszat hidrogénezzük, és utána celiten szűrjük. A szűrletet 20 ml etilacetáttal mossuk és szárazra pároljuk, úgy a cím szerinti vegyületet kapjuk. ‘H-NMR (300 MHz, D20) azonos, a cím szerinti vegyület bioszintetikus mintáira adott értékkel, m/c (erős atombombázás): 345 (MH*). 6. előállitásmód 6j3-(3-karboxi-feni!-acctil-amino)-2,2-dimetilpenam-3-karbonsav előállítása 6-APA-val 1) Izoftálsav-mono-p-nitro-benzilészter 3,22 g (28 mmól) izoftálsav, 6,0 g (28 mmól) pnitro-benzil-bromid és 7,7 ml (56 mmól) trietil-amin 65 ml etil-acetáttal készített elegyét visszafolyatás közben melegítjük 6 óra hosszat. Ezután az elegyet betöményítjük, és így csapadékot kapunk, amely az 1) pontban említett cím szerinti vegyület és izoftálsav 1 :1 arányú elegye. A kapott mennyiség 4,6 g, amely körülbelül 25%-os kitermelésnek felel meg. Az elegyet tisztítás nélkül további átalakításhoz használjuk fel. ‘H-NMR (CDC13„ 60 MHz): 8 5,53 (2H, s, C//2C6H4N02), 7,42-7,85, 8,08-8,0 és 8,47-8,52 (8H, 3Xm, Ar—//). 2) 3-(p-nitro-benziloxi-karbonil)-feuil-ecetsav 4 g körülbelül 50%-os tisztaságú (körülbelül 13 mmól) 1) pont szerinti nyers monoészter 16 ml benzollal készített oldatát 16 ml tionil-kloriddal kezeljük és 80 °C-on melegítjük 1,5 óra hosszat. Ezután az oldatot lehűtjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a maradékhoz 15 ml benzolt adunk, és ismét vákuumba visszük annak érdekében, hogy a maradék tionil-kloridot eltávolítsuk. A nyers savkloridot újra feloldjuk 20 ml benzolban és diazometán éteres oldatával kezeljük 0 °C-on. Az éteres oldatot feleslegben alkalmazzuk, és az elegyet 20 percig keverjük. A reakcióelegyet ezután szárazra pároljuk és a maradékot 6 ml p-metoxi-benzil-alkohollal kezeljük. A keletkező elegyet 50-60 °C-ra melegítjük, és 3X0,3 g Ag20-t adunk adagonként hozzá 20 perces időközökben, majd a keverést további 30 percig folytatjuk. Ezután a reakcióelegyet lehűtjük, 30 ml kloroformmal hígítjuk, körülbelül 0,5 g aktívszénnei kezeljük, celiten szűrjük és szárazra pároljuk. A maradékot kromatografáljuk szilícium-dioxidon, az eluálást 7 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
