198093. lajstromszámú szabadalom • Eljárás humán- vagy állatgyógyászati készítményekben alkalmazható kopolimerek és ilyen kopolimereket tartalmazó, a hatóanyagot folyamatosan leadó humán- és állatgyógyászati készítmények előállítására
9 !98 093 10 vizet tartalmazó DL-tejsavban oldunk keverés közben, nitrogén-atmoszférában. Az oldatot 140 °C-ra melegítjük, és a vizet 8 óra alatt kidesztilláljuk az elcgyből. Ezalatt az elegj egyre viszkózusabbá válik, és hőmérséklete 190 C-ra emelkedik. Amikor több víz már nem desztillál át, a nyomást körülbelül 25 Hgcm-re csökkentjük, és az elegyet további 8 órán át melegítjük. Végül a nyomást 0,1 Hgmm-re csökkentjük, és az elegyet 8 órán át 200 °C-on tartjuk. Nagyon viszkózus, ámbraszínű terméket kapunk. A pointert lehűlni hagyjuk, és a lombikot összetörjük. A terméket apró darabokra törjük, 1,5 liter metanolban oldjuk, majd az oldatot 10 liter desztillált vízbe öntjük. A kivált csapadékot elkülönítjük, további 5 liter vízzel mossuk, és vákuumban 8 órán át szobahőmérsékleten, majd 16 órán át 100 °C-on szárítjuk. Ámbraszínű, üvegszerű terméket kapunk, amelyben a poli-(vinil-alkoho!)-vázhoz elágazóan kis molekulatömegű poli-tejsav láncok kapcsolódnak. A tennék kloroformos oldatának határviszkozitása 0,65. A termék körülbelül 85% politejsavat tartalmaz, és a politejsav-oldalláncok átlagos lánchossza körülbelül 3,5 egység. Megismételjük a fenti eljárást azzal a különbséggel, hogy DL-tejsav helyett azonos mennyiségű DL-laktidot használunk. Ámbraszínű, üvegszerű terméket kapunk, amelyben a poli-(vinil-alkohoi)-vázhoz elágazóan kis molekulatömegű polilaktid láncok kapcsolódnak. A termék klorofomos oldatának határviszkozisáta 0,66. A termék körülbelül 85% polilaktidot tartalmaz, és a polilaktid oldalláncok átlagos lánchossza körülbelül 3,5 egység. Az így kapott polimerekből 100 °C-on öntéssel 1 cm X 0,2 cm X 0,2 cm méretű hasábokat készítünk, és a hasábokat 37 °C-os vízbe merítjük. A termékek vizet kötnek meg, hajlékonyakká válnak, majd bomlásnak indulnak., és 2—2,5 hónapon át oldható anyagokat adnak le. 10. példa 45 mg 80/20 arányú poli-(DL-laktid)/pcli-(etilénglikol) 6000 kopolimer (a kloroformos oldat határviszkozitása 0,36) 2,5 ml 90%-os vizes ecetsavval készített oldatához 285 pl, 21 mg/ml koncentrációjú, desztillált vízzel készített egér epidermisz növekedési faktor-oldatot adunk. A kapott oldatot fagyasztjuk, majd 24 órán át körülbelül 0,01 Hgmm nyomáson fagyasztva szárítjuk. A fagyasztva szárított anyagból ömlesztéssel, 60 °C-on két implantációs készítményt állítunk elő. Az egyik implantációs készítmény tömege 13,5 mg, és 1,3 mg pepiidet tartalmaz, míg a másik készítmény tömege 15,3 mg, és 1,5 mg pepiidet tartalmaz. Az implantációs készítményeket szubkután úton macskákba ültetjük be. A macskák gyomrába előzetesen szondát vezetünk. A macskák véréből mintát veszünk, és vizsgáljuk, hogy a kiválasztott gyomornedv hogyan reagál hisztaminra. A vérmintában a beültetést követő legalább 3 napon át mutatható ki peptid radioimmunolögiai méréssel, és a kiválasztott gyomornedvben a beülielést követő 3—6 napon át észlelhető gátló hatás. 11. példa 36 mg 85/15 arányú poli-(DL-laktid)/6000-es mdekulatömegű poli-(ctilén-glikol) kopolimer (a kloroformos oldat határviszkozitása 0,39) 1,8 ml 90%-os vizes acetonnal készített oldatához 120 pl desztillált vizes egér epidermisz növekedési faktorohiatot adunk (az oldat 320 liter desztillált vízben 10 5 mg pepiidet tartalmaz). A kapott oldatot fagy isztjuk, és éjszakán át fagyasztva szárítjuk. A fagyasztva szárított termékből 70 °C-on ömlesztéssel 16,9 mg súlyú, körülbelül 1 mmXI mmX5 mm méretű implantációs készítményt készítünk. A készítményt 10% emberi vérszérumot és 0,1 % nátrium-azidot tartalmazó vízbe merítjük. A peptid legalább 15 napon át folyamatosan szabadul fel. 12. példa Összehasonlító kísérleteket végeztünk annak megál'apítására, hogyan befolyásolja a tömb-kopoiimer összetétele és hidrofil jellege a polipeptid felszabadulását. Az implantációs készítmények előállításához a következő kopolimereket használtuk fel: a) 25 tömeg% 6000-es molekulasúlyű poli-(ctiléngfko!)-t és 75 tömeg% poli-(DL-laktid)-ot tartalmazó tömbkopolimer (a kloroformos oldat határviszkozitása 0,39); és b) 5 tömeg % 6000-es molekulasúlyú poli-(etiiéngl kol)-t és 95 tömeg % poli-(DL-laktíd)-ot tartalmazó tömbkopolimer (a kloroformos oldat határviszkozitása 0,79). 76,2 mg a) vágy b) polimert és 23,8 g JC1 118 630- acetátot (20 mg tiszta peptidde! egyenértékű mennyiségű só) 1,5 ml anhidridmentesjégecetben oldottunk. Az oldatot fagyasztottuk, 18 órán át fagyasztva szárítottuk. majd a fagyasztva szárított termékei körűibe lül 70°C-on mcgömlesztve 45—50 mg súlyú implantációs készítményt állítottunk elő (a készítmény közelítő méretei: 0,2 cmvX 0,2 cm X1 cm). A^ készítményeket 1 ml 37 °C-os Mclivains pufferoldatba (pH = 7,4) merítettük. A vizes közegből időrí: 1-időre mintát vettünk, és nagynyomású folyadékki omatográfiás módszerrel meghatároztuk 3 minta p' ptid-tartalmát. Az eltávolított vizes közeget minden esetben azonos térfogatú friss pufferoldattal pótoltuk. A mérések szerint a nagyobb mértékben hidrofil (75% poli-/etilén-glikol / -1 tartalmazó) kopolimer mátrixból körülbelül 18 napon át szabadul fel a hatóanyag. Ezzel szemben a kevésbé hidrofil (5% poli/e tilén-glikol/-t tartalmazó) mátrixból a hatóanyag legalább 250 napon át szabadul fel folyamatosan. 13. példa 5000-es molekulatömegű poli-(etilén-glikol-metilérer)-t az 5. példában ismertetett módon tisztítunk. 20 g tisztított poli-(ctilén-glikol-mcti!-étcr)-t 1 órán á? 160 °C-on, 0,01 llgmm nyomáson szárítunk. A polimerhez 80 g száraz, frissen készített DL-laktidot 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
