198090. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L 17046 antibiotikum előállítására
9 198 090 10 kai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint, az ATCC 31121 törzzsel végzett fermentációval állítunk elő), amelynek víztartalma 10 tömeg%(Karl Fischer módszer), 800 ml, száraz sósavat tartalmazó vízmentes tctralűdrofuránban szus/.pcndáhmk. A reakcióclegyet 25—30 °C-on 3 órán át kevcrtctjük, miközben gázalakú sósavat buborékoltatunk át. Ezután a sósav átbuborékoltatását abbahagyjuk, és a keveréket további 12 órán át 25 °C-on kevertetjük. Az oldhatatlan anyagot szűrőn összegyűjtjük, 500 ml dietiléterrel és ezután 100 ml accIonnal mossuk. A szilárd anyagot egy éjjelen át vákuumban (3.99X 102 Pa) szárítjuk; így 30,4 g nyersterméket kapunk, amelyet 2 liter 4 :1 (térf./ térf.) víz : metanol elegyben oldunk. Ezután erőteljes kevertetés mellett 3 liter víz 2 liter etilacetát és 2 liter n-butanol elegyét adjuk hozzá. Egy éjjelen át való állás után a vizes réteget elkülö nítjük, majd vákuumban (19,95 X102 Pa) 45 °C-on, 400 ml vég-térfogatra töményítjük be. A pH-t 5.9-re beállítva — IN NaOh-dal — szilárd csapadékot kapunk. A szilárd anyagot szűréssel összegyűjtjük, 400 ml vízzel mossuk, majd ezt követően 400 ml dietilétcrn:l és 200 ml acctonnal mossuk. A szilárd anyagól 24 órán át vákuumban (1.665X 102 Fa) 45 C-on szárítjuk. 24,5 g lényegében tiszta L 17046 antibiotikumot kapunk (HPLC titer 95% felett; víztartalom rendszerint 10 tömeg% alatt). A termék az előbbiekben leírt fizokémiai jellemzőkkel rendelkezik. 2. példa 2,35 g teikoplanin A2 faktort (pl. azt a teikomicin A2-t, amelyet a 4 239 751 sz. amerikai egyesült ál]amokbeli szabadalmi leírás szerint állítottunk elő) amely 10 tömeg % vizet tartalmaz, az 2. példában leírt módon kezelünk, a megfelelő mennyiségű oldószer és reagensek alkalmazásával. A lényegében tiszta L 17046 antibiotikum kitermelése 1,62 g. 3. példa a) Az L 17054 antibiotikum előállítása 5 g teikoplanin komplexet, amely 10% vizet tartalmaz, hozzáadunk 60 ml 0,5 N vizes sósavhoz, amelyet 80°C-ra melegítettünk elő, erőteljes kcvcrtctcs mellett. A kevertetést 30 percen át folytatjuk, és a hőmérsékletet kb. 80 °C-on tartjuk. Ezután a keveréket gyorsan szűrjük, a szűrletet 0-5 °C-ra hűtjük, 10 ml 6N sósavat adunk az elegyhez. A kapott szuszpenziót kb. 15 percen át kevertetjük, mialatt a hőmérsékletet 0—5 °C-on tartjuk. A csapadékot összegyűjtjük, 20 ml hideg IN sósavval, majd dietilcterrcl mossuk, és csökkentett nyomáson szobahőmérsékleten szárítjuk így 4.5 g nyers L 17054 antibiotikumot kapunk, hidrokloríd alakban. Ennek a terméknek egy hányadát a következő eljárás szerint tisztítjuk: 3 g L 17054 antibiolikum-liidrokloridol 150 ml 95:5 (idjT./léif.) arányú 0,2%-os vizes ammoniumformiát/acetoaitril elegyben oldunk. A pH-t IN Naüli dal kb. 7,5 re íiiliijitk be, es a termeket oldjuk. A kapott oldatot felvisszük egy oszlopra, amely 150 g szilanizált szitikagclt (0,06— 0,2 mm, Merck) tartalmaz, ugyanebben az oldószcrclcgyben. Az oszlopot lineáris gradiens elúcióval fejlesz tjük ki — 5—21% acelcnitrilt 0.2%-os vizes emmóniumformiáiban. téri,/térf. — és 20 ml es frakciókat szedünk, amelyeket HPLC segítségével vizsgálunk. Az L 17054 antibiotikumot tartalmazó frakciókat (70-96) egyesítjük és az acetonitrilt vákuumban eltávolítjuk. A visszamaradt vizes oldatot felvisszük egy oszlopra, amely 10 g szilanizált szilikagélt (0,06- 0,2 mm, Merck) tartalmaz, desztillált vízben. Az oszlopot desztillált vízzel mossuk, amíg a sókat teljesen el nem távolítjuk, majd a terméket 1 :1 (térf./térf.) acetonitril :víz Heggyel eluáljuk. Az összegyűjtött oldatot vákuumban kis térfogatra üiményíljük be, és az antibiotikumot aceíon hozzáadásával kicsapjuk Szobahőmérsékleten való szárítás után 0,9 g tiszta : 17054 antibiotikumot kapunk Az j. 17054 a következő -uhúdonságoV-at mutatja: < fajlagos fr.5i-gaf.1s, (alfa)* ~ -34 (c — 1%, b) korlátlanul oldható vízben pii S,0 felett, dimetil formám inban, dímet ils/.ulfevidfean. p.opÜénghkolban és nietilcdKv.osvban; kevéssé oldható metanolban; csaknem oldhatatlan dictiiéterben és acetonban; c) UV abszorpciós spektrum a következő maximumokat mutatja: 0,1 N sósavban: iambdawax 278 nm (Ej - 60,6), 0,1 N náfriumhidroxidban; lamhdam#x 297 nm (E^ — 118,8». — plí 7,4 foszfát-pufíerbc!) lambda,,,as 277 nm (E*^ - 70,3). d) ÍR abszorpciós spektrum ingóiban a következő abszorpciós maximumokat mutatja (cm~3 * 5) 3'f CO— 2000, 2970-7850 (nuioí), 1655, 1610, 1595, 1515. 1490, 1460 (iiujolt, 1375 i nujol), 1300, 1230, 1145. IÜŐ0, 1020, 9 7Ú, 890. «50. 820, 720 (nujol); ■-) elem-analízise, amelyet azt Követően végzünk, hogy a mintát előzetesen kb. 140 *C-on közömbös atmoszférában szárítottuk (tömegveszteség ~ = 7,8%), a következő közelítő százalékos összetételt mutatja: szén 55,46%; hidrogén 4,50%; nitrogén 7,20%; klór 4,67%; hamu 0,2% (átlag); f) a jelzett TLC rendszerekben a következő Rf értékeket mutatja: clúciós rendszer (térf./ térf.) Re érték acetonitril/víz 75 "25 0,32 (szílikagél Merck 60 F«4) acclonitii!/5%-os vizes nátriumszulfát 30:70 0,61- (szilanizált szílikagél Merck 60 FI54) i Előhívás: UV fény 254 nmen; 3%-os etanolos niulii Irin, 1%-os metnnolos fiuorcszkamin; g) dúciós Idő (tR) 8,3 oesc lJPiC-vd végzet! elemzés soián, 150X4,0 mm-es Zoíbaxr' DOS (5-6 .um) 5 10 15 20 30 35 40 50 55 6C sr 6
