198090. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L 17046 antibiotikum előállítására
II 198 090 12 oszlop alkalmazásával (a Zorbax a Dupont Co. védjegye oktadecilszilán szilikagél mátrixra vonatkozóan); az eluálást lineáris grádiens mellett — 0—50 % B oldat az A oldatban — hajtjuk végre, 40 perc alatt (A oldat: 25 mM NaII2P04 / acetonitril 9 :1, 0,1 N NaOH-dal pH 6,0-ra pufferoiva; B oldat: 25 mM NafHPCWacetonitril 3 :7. 0,1N NaOH-dal pH 6,0-ra pufferoiva; áramlási sebesség 2 nü/perc); belső standard: 3,5-dihidrotohiol, tR 5,60 perc; h) az !H NMR spektrumot 270 MHz-en vesszük fel DMSO-d6-ban, 60 °C-on és 20 mg/ml minta-koncentráció mellett (belső standard TMS delta = ~0,00 ppm); néhány !ll NMR adatot, amelyet D20-kicserélés és szelektív szétkapcsoló kísérlet után kaptunk, a következőkben mutatunk be: (delta, ppm, multiplicitás): 1,88, s; 2,85, d; 3,5, dd; 3-4; 4,20, d; 4,48, d; 4,50, d; 4,62. s; 4,96, ddd; 5,18, d; 5,31, s; 5,35, d; 5,39, s; 5,68, d; 5,71, s; 6,20. d; 6,41, s; 6,51, s; 6,56, s; 6,74, d; 6,77, s; 6,80, s; 6,80, d; 6.98, d; 7,08, s; 7,15, d; 7,21, d; 7,28, d, 7,35, d, 7,50, d; 7,56, d; 7,64, d; 7,73, d; 7,86, s; 8,42, d; í) a potenciometrikus titrálás a következő titrálási profilokat mutatja: pH 1/2 5,0 (egy egyenérték), 7,0 (egy egyenérték 4 :1 mcíilcelloszolv :víz clegyben, ha a vizsgálandó vegyület 0,0) N sósav-felesleget tartalmazó oldatát metilcelloszoiv : víz elegyben 0,0IN NaOH-dal titráljuk, amelyet ugyanezzel az oldószerrel készítettünk el), és egy titrálási görbe pH 1/2 12,8 értékkel (5 egyenérték), ha a vizsgálandó vegyület 9 :1 DMF :víz elcggyel elkészített, 0,iN sósav-felesleget tartalmazó oldatát ugyanebben az oldószer-e jegy ben 0,1N KOH- dal titráljuk); !) egy sóképzésre képes sav-funkció; m) egy sóképzésre képes bázis-funkció; n) két cukor-maradék, közelebbről D-mannőz és N- ace t il- D -gl ukózam in. A fizikokémiai adatok alapján cs más ismert glukopepíid antibiotikumok — pl. a vankoinicin és a risztocetin — szerkezetével való összehasonlítás alapján az L 17054 antibiotikumnak a (VI) általános képlet szerinti szerkezet tulajdonítható amelyben X jelentése alfa-mannóz csoport. b) Az L 17054 antibiotikum előállítása 3,7 g nyers L17054 antibiotikum-hidrokloridot — amely 11 tömeg % vizet tartalmaz — 80 ml száraz tetrahidrofuránban szuszpendálunk, amelyet száraz sósavval telítettünk. A rcakcióclcgyet 2 órán át 28— 30 °C-on kcvcrlctjük, miközben száraz sósavat buborékoltatunk át. Ezután a sósav-átbuborékoltatást megszüntetjük, és a reakcióelegyet 6 órán át állni hagyjuk, kevertetés közben, 25 °C-on. Az oldhatatlan anyagot ezután szűrőn összegyűjtjük, és egymás után 200 ml dietiléterrel, majd 100 ml acetonnal mossuk. A szilárd anyagot egy éjjelen át szántjuk, és tisztítjuk, ugyanazt az eljárást követve, amelyet az 1. példa befejező részében leírtunk, megfelelő mennyiségű oldószer és reagensek felhasználásával. Kitermelés: 2,98 g lényegében tiszta L 17046 antibiotikum. 4. példa 11 g teikoplanin komplexet — amely 20 tömeg % vizet 'artalmaz — az 1. példa szerinti eljárással kezelünk ; így 8.3 g nyers terméket kapunk. Ezt a nyers terméket — amely (HPLC elemzés alapján) az L 17046 antibiotikum további hidrolíziséből származó nem-kívánt melléktermékeket is tartalmaz, kb. 17% mennyiségben, a következő eljárás szerint tisztítjuk. Feloldjuk 1 liter 4 :1 víz:metanol elegyben (térf./térf.) és pH 1,8-ig IN sósavat adunk az oldatl oz. Ezután, erőteljes kevertetés közben, 1 :1 (térf./térf.) n-butanol :víz elegyet adagolunk, 2,4 liter menu .őségben. Egy éjjelen át szobahőmérsékleten való állás után a vizes réteget elkülönítjük és vákuumban <19,95X 102 Pa) 45 °C-on 250 ml térfogatra töméiiyítjük be. Az elegy pH-ját IN NaOH hozzáadására! 5,9-re állítjuk be, és a kicsapódó szilárd anyagot szűrőn összegyűjtjük, 100 ml vízzel, majd egymís után 200 ml dietiléterrel és 100 ml acetonual mossuk. A terméket egy éjjelen át vákuumban (1.665X102 Pa) 45 °C-on szárítjuk. így 3,48 g lényegébej tiszta L 17046 antibiotikumot kapunk. A szerves réteget — további végtermék-mennyiségek 1 inyerésére — a következő eljárás szerint dolgozzuk fel. A szerves réteget vákuumban (19.95X 102 Pa) kis térfogatra föményítjük be, majd 500 ml dictilétert adunk hozzá. A szilárd csapadékot szűrőn összegyűjtjük, 100 ml dietiléterrel mossuk és vákuumban (l,6o5X102 Pa) szobahőmérsékleten, egy éjjelen át szári juk. így 2,71 g nyers termeket kopunk. Ezt a nyeri terméket 200 ml 9:1 (térf./térf.) víz:acctonitri elegyben szuszpendáljuk és a keverék plí-ját IN :ósav hozzáadásával 1,9-re állítjuk be. A kapott olda ot — 200 ml víz hozzáadása után — 200 ml/óra sebességgel felvisszük egy 300 g szilanizált szilikagélt tartílmazó oszlopra (0,06—0,20 min, Merck), amelyet I %-i >s vizes amnióniumforiniát oldattal stabilizáltunk. 20 ml-es frakciókat szedünk, és ezeket HPLC- vcl határozzuk meg. A lényegében tiszta L17046 antibiotikumot tartalmazó frakciókat egyesítjük, és vákuumban (19.95X102 Pa) 40 °C-on kis térfogatra tón ényítjükbe (szükség esetén a pH-t 1 N NaOH vagy 1N HC1 hozzáadásával 5,9-re állítjuk be). A szilárd csapadékot szűrőn összegyűjtjük, és vízzel, majd dietilétcjrcl mossuk. Vákuumban (1.665X10' Pa) való — egy éjjelen át tartó — szárítás után további 1,37 g lényegében tiszta L17046 antibiotikumot kapunk. 5. példa 40 ml 96%-os (tömeg/tömeg) kénsavat 80 ml tét ahidrofuránban oldunk, és az oldathoz kevertetés mellett, 3 °C-on hozzáadunk 4,5 g teikoplan komplexet, amely 10 tömeg% vizet tartalmaz. A reakcióelegyet 2 napon át 15—20 °C-on kevertetjük; így sötétbarna oldatot kapunk. 1 liter dietiléter hozzáad ísa után ragacsos szilárd anyagot kapunk, amelyet ell ülönítünk és 100 ml 4:1 dietiléter: metanol elcggyel dörzsölünk el. A kapott port szűrőn összegyűjtjük, 100 ml dietiléterrel mossuk és vákuumban ("l ,665X102 Pa) 50 °C-on egy éjjelen át szárítjuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
