198089. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a gonadotropint felszabadító hormon antagonista dekapeptid származékok előállítására
7 198 089 8 A találmány szerint úgy járunk cl, hogy a fenti köztitermékről a jelenlevő X1 2-X6 védőcsoportokat és az X7 8 9 10 11 12 13 csoportban adott esetben jelenlevő gyantát lehasítjuk. A pepiid tisztítása céljából karboxi-metil-cellulóz oszlopon ioncserélő kromatográfiát végzünk, majd a további tisztítást önmagában ismert módon, megoszlásos kromatográfiás módszerrel (Scpliadcx G—25 oszlopon, elucnsként n-butanol és 0,1 normál ccctsavoldat 1 :1 térfogatarányú elegyét használva), vagy nagyfelbontású folyadék-kromatográfiás módszerrel végezzük, amint ezt J. Rivier és munkatársai [J. Chromatography, 288, (1984) 303-328] leírták. A jelen találmány szerinti peptidek már testsúlykilogrammonként 100 jug-nál kisebb dózisszinteken is kifejtik hatásukat, és ha e vegyületeket nőstény patkányoknak a proösztrusz napján (az ovulációt megelőző napon), körülbelül déli 12 órakor beadjuk, akkor megakadályozzák az állatok ovulációját. Ila hosszabb időn át meg akaijuk akadályozni az ovulációt, akkor szükséges lehet, hogy tcstsúlykilogrammonként körülbelül 0,1 mg és körülbelül 2,5 mg közötti dózisszinteket használjunk. Ezek az antagonísták hím emlősökön is hatásosak, amennyiben felfüggesztik a spermatogenezist, és ezáltal fogamzásgátló szerekként használhatók. Miután e vegyíiletck csökkentik a tcsztoszlcron szintjét (ami a normális, szexuálisan aktív hím emlősök esetében egy nemkívánatos következmény), célszerű, ha a gonadotropin releasing honnon antagonistájával egyidejűleg a csökkent tesztoszteron szint helyreállítása céljából tesztoszterouí is adagolunk. Ezeket az antagonistákat más célokból is használhatjuk a gonadotropinok, és a szteroid nemi hormonok termelésének szabályozására, amint ezt a fentiekben már említettük. A találmány szerinti eljárást - a találmány oltalmi körének szűkítése nélkül — az alábbi példákkal szemléltetjük. A jelen leírásban alkalmazott — és a fentiekben még nem ismertetett — rövidítések jelentése az alábbi: Ile izoleucin Arg arginin Pro prolin NMB Leu dehidro Pro 0-Ü-1NAL 0-D-2NAL PÁL D-3PAL (4F)-D-Phe (4C1)-D-Phe (4N02)-D-Phe (4-gua)-D-Phe (irnBzl)-D-His (For)-D-Trp (6N02)-D-Trp Ac N“lfa-metil-lcucin dehidro-prolin D-béta-(l-naflil)-alanin D-béta-(2-uaftil)-alanin piridil-alanin D-(3-piridil)-alanin D -(4-flu or-fe nil)-al an in D-(4-klór-fenil)-alanin D-(4-nitro-fenil)-alanin D-(4-guanidino-fenil)-alanin az imidazolgyűrű 1-es nitrogénatomján benzilcsoporttal helyettesített D- hisztidin 1-formil-D-triptofán (az indolgyűrű N-atomján) az indolgyűrű 6-os helyzetében nitrocsoporttal helyettesített D-triptofán acetilcsoport. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 1. példa Az (Ac-j3-D-2NAL\ (4F)D-Phe2, (6N02)D-Trp3 4 5, D-Arg6/-GnRH képlettel jellemezhető peptid szilárd fázisú szintézisét az alábbiakban példaképpen ismertetjük. E peptid teljes képlete a következő: Ac-|3-D-2NAL-(4F)D-Phe-(6N02)D-Trp-Ser-Tyr- Ü-Arg-Lcu-Arg-Pro-G!y-NlI2. (I. sz. vegyület) A többi pepiidet is hasonló módon állítjuk elő és tisztítjuk meg. A szintézist egy benzhidril-amin típusú gyantán végezzük, amelyhez először a tercier-butoxi-karbonilcsoporttal védett glicint kapcsoljuk 2 órás reakcióidővel. díklór-mctános közegben, a védett aminosnv háromszoros fölöslegét használva, és aktiválószerként diciklohexil-karbodiimidet alkalmazva. Ennek a kapcsolásnak az eredményeképpen a glicin egy amidkötéssel kapcsolódik a benzhidril-arnin típusú gyantához. Az egyes aminosavak kapcsolása után a gyanta kimosását, a védőcsoport lehasítását és a következő aminosavvnl való kapcsolást körülbelül 5 g gyanta felhasználásával, egy automatizált készülékben, az alábbi műveleti rend szerint végezzük: Keverési Lépés Reagens és az elvégzendő művelet idő, perc 1. A gyantát 2X80 ml diklór-metánnal mossuk 3 2. A gyantát 2X30 ml metanollal mossuk 3 3. A gyantát 3X80 ml diklór-metánnal mossuk 3 4. A gyantát 2X70 ml 5%-os, diklórmetán és trifluor-ecetsav 1:1 arányú elegyével készült 1,2-dimerkapto-etánoldattal mossuk 10 5. A gyantát 2X80 ml 1 %-os, izopropanolos 1,2-dimerkapto-ctán-oldattai mossuk 3 6. A gyantát 2X70 ml 12,5%-os, diklórmetános trietil-amin-oldattal mossuk 5 7. A gyantát 2X40 ml metanollal mossuk 2 8. A gyantát 3X80 ml diklór-metánnal mossuk 3 9. A gyantát 1X10 millimól, az. aminocsoportján tcrcicr-butoxi-karbonilcsoporttal védett aminosav 30 ml dimetiiformamiddal vagy diklór-metánnal készült oldatával (az oldószer megválasztása az adott, védett aminosav oldhatóságától függ), plusz 10 millimól diciklohexil-karbodiimid diklór-metánnal készült oldatával kezeljük 30—300 10. A gyantát 2X40 ml metanollal mossuk 3 11. A gyantát IX70 ml 12,5 %-os diklórmetános trietil-amin-oldattal mossuk 3 12. A gyantát 2X30 ml metanollal mossuk 3 13. A gyantát 2X80 ml diklór-metánnal mossuk. 3 65
