198079. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hidrofób cisz-platina-komplexek előállítására és liposzómába történő beépítésére
13 198 0^9 14 7 :3 arányú elegyében és DMPC :DMPG = 7 :3—PT- ben szuszpendálva. DMPC :DMPG = 7 :3—PT-t szintén adagoltunk intravénásán (iv) egyetlen injekcióban, vagy napi 3 injekcióban. A klinikai viselkedést ^ és a túlélési időt figyeltük naponta. Az LD|0. LD50 és LD90 értékeket számoltuk az adagolás után eltelt 14 nap alatt bekövetkező elhullásból. PT hidroxi-propil-cellulózban szuszpendálva, DMPG-PT és DMPC—DMPG = 7 :3-PT hasonló 10 DLD50 értéket mutatott egyetlen ip. injekció esetén (91 mg/kg, 86 mg/kg és 75 mg/kg) (1. III. táblázat). A DMPG és DMPC :DMPG = 7:3 üres liposzótnába kapszulázott PT LD50 értéke magasabb volt (183 mg/kg és 304 mg/kg). Az iv adagolt DMPC :DMPG = 15 = 7 :3—PT LD50 értéke hasonló volt egyetlen injekció és napi 3 injekció esetén (82 mg/kg és 96 mg/kg). A legtöbb elhullás máid az iv mind az ip adagolás esetén az injekció utáni 5. és 10. nap között következett be. Az eredményeket a 111. táblázatban adjuk 20 meg. CDDP, szabad PT és L-PT akut nefrotoxieitása LD50 dózisnál egerekben IV. táblázat LDso dózis BÚN 96. órában1 Készítmény ip egyetlen injekció / (mg/kg) CDDP 17 78.3±8.0 Szabad PT 91 34.4±9.6 DMPG-PT 86 30.0±4.6 DMPC:DMPG 7:3 75 32.0±2.3 'Normál = 27.2±mg%. 10. példa Ciklopentén-karboxiláto-racém-DACH-Pt in vivo antitumor aktivitása L1210 sejtek ellen III. táblázat Különböző L—PT készítmények toxieitása IP és IV adagolás esetén 25 L-PT Adagolás LD10 LD5o LD 50 30 készítmény módja mg/kg mg/kg mg/kg Szabad PT ipX 1 61 91 125 DMPG-PT DMPC : DPMG ipX 1 56 86 133 35 7:3-PT ipXl 54 75 94 iv X1-82 100 iv gdX3 63 86 107 DMPG* DMPC : DMPG ipX 1 158 183 228 40 7:3* ipX 1 >304 >304 >304 *A LDjo, LDS0 és LD^ értékeknél kapszulázott PT értékek. 45 9. példa Nefrotoxicitás b 0 A vér karbamid-nitrogén (BÚN) tartalmát határoztuk meg 22—25 g testsúlyú CDj svájci egerek retroorbitális érfonatából vett mintában 96 órával a CDDP, PT ciklopentén-karboxiláto-racém-DACH hidroxi- 55 propilcellulózban, DMPG—PT vagy DMPC : DMPG = = 7 :3—PT injektálása után (egyetlen dózis) az LD50 értéknek megfelelő dózisban. A toxieitásra vizsgált L-PT készítményeket a vizsgálat napján készítettük. Nem volt lényeges BÚN emelkedés a PT LD50 dózisú 60 ip adagolása után hidroxi-propil-cellulózban szuszpendálva, DMPG-PT és DMPC: DMPG =7 :3-PT formájában adagolva (BÚN 96 óra múlva 34,4±9,6 mg%, 30,0±4,6 mg%, illetve 32,0±2,3 mg%). Az eredményeket a IV. táblázatban foglaltuk össze. 65 L1210 leukémia sejteket neveltünk 10% lószérummal, glutaminnal, sztrcptomicennel és penicillinnel kiegészített McCoy közegben (Gibco Laboratories, Grand Island, NY, USA) szuszpendálva, 37 °C-on, 95% relatív nedvességnél, 5% C02 atmoszférában. 4 ml sejtszuszpenziót adtunk a tenyésztőcsövekbe, és a megfelelő mennyiségű szabad PT-t és L—PT-t (0,01 mikrogramm/ml — 10 mikrogramm/ml végső koncentrációig). 96 óra után a kontroll és a kísérleti sejtkoncentrációt a kontroll tenyészet és a kísérleti tenyészet sejtkoncentrációját egy Coulter Counterrel meghatároztuk (Coulter Electronics, Hialeah FLA), és számoltuk a gátlás százalékát. A következő készítményeket vizsgáltuk: szabad PT, DMPG, DMPC : DMPG = 7:3, DMPG-PT és DMPC : DMPG = = 7 :3—PT. Az eredményeket az 50%-os gátlás érdekében (IDS0) fejeztük ki. Az üres liposzónuíkra vonatkozó eredményeket a PT mennyiségben fejeztük ki, amennyit az ID5o koncentrációnál kellett volna kapszulázni. A szabad ciklopentén-karboxiláto-racém-DACH-ra vonatkozó IDS0 érték 1,3 mikrog/ml volt (1. V. táblázat). A két vizsgált L—PT készítmény közül DMPGPT kissé aktívabb volt, mint a DMPC:DMPG = = 7:3—PT (három kísérlet átlagos ID50 értéke: 0,7, illetve 1,6 mikrog/ml. A DMPG-ből készült üres liposzómák ID50 értéke 3,7 mikrog/ml volt, míg a DMPC : DMPG = 7 :3 üres liposzómák IDS0 értéke több, mint 10 mikrog/ml volt (1. V. táblázat). V. táblázat Szabad PT, L—PT és üres liposzómák in vitro antitumor aktivitása L1210 sejtekkel szemben Készítmény 1 ^50 2 3 Átlag Szabad PT 1,3 _ ,_ _ DMPG-PT 0,7 1,0 1,4 0,7 DMPG2 3,0 3,0 5,0 3,7 8
