198054. lajstromszámú szabadalom • Eljárás repamicin-származékok és hatóanyagként az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 198.054 Oldhatóság vízben: > 50 mg/ml Nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálat körülményei Oszlop: RP-I8, 150 mm hosszú, 4,6 mm belső átmérőjű Előtét-oszlop: 50 mm hosszú, 4,6 mm belső átmérőjű Mozgó fázis: 87 tömegrész metanol és 13 tömegrész foszfát-puffer (0,025 mól/l, pH 3,4) elegye Detektor: Kratos 783 UV 254 nm Átfolyáso sebesség: Retenciós térfogat: x: új RP C-18 oszloppal két csúcsot észlelünk, amelyek valószínűleg a makrociklusos lakton-gyűrűben az amid-kötés körüli cisz-transz izomerek Plazma/szövet stabilitás, 37,5 °C-on 1.5 ml/perc 9.5 ml* 50 jug pro-dorg/ml humán plazma 50 pg pro-drog/ml patkány plazma 50 pg pro-drog/ml májhoinogenizátum t,n (óra) 5,GT 1,8 4,5 5 10 15 20 Plazma/szövet stabilitás, 37,5 °C-on 50 pg pro-drug/ml humán plazma t^(óra) 25 50 pg pro-drug/ml patkány plazma l’,0 50 pg pro-drug/ml méjhomogenizátum 3,7 Plazma/szövet stabilitási vizsgálat 37,5 °C-on Koncentráció t,í2(óra) 5,60 30 (pg/ml) A. Humán plazma 200 100 4,80 50 5,00 B. Patkány plazma 200 2,50 35 100 1,80 50 1,75 C. Májhomogenizátum 50 4,50 Gyógyászati készítmény előállítása 40 A fenti pro-drugot vagy vízben vagy 5 tömeg% dextrózt tartalmazó desztillált vízben oldva alakítjuk injekciós készítménnyé. Az oldatokat frissen kell elkészíteni és azonnal fel kell használni, lehetőleg 1 órán belül. A pro-drog láthatólag elszíneződik, ha hosszabb ideig fény éri. Ennek megelőzésére megfelelő óvintézkedéseket kell tenni. 3. példa Repamicin-mono-(28)-3-(N,N-dietiI-amlno)-propionát-hídrogén-klorid-só előállítása cq Száraz, 100 ml-es gömblombikba 1,00 g (1,09 x 10'3 mól) rapamicint, 0,34 g (2,16 x 10"3 mól) N,N-dietil-amino-propionsav-hidrogén-kloridot és 0,50 g (2,43 x 10'3 mól) dlciklohexll-karbódiimidet mérünk. A lombikban nitrogénatmoszférát biztosítunk, majd az elegyhez 25 ml foszfor-pentoxid felett szári- 55 tott vízmentes metilén-kloridot, és ezt követően 15 mg 4-(dimetil-amlno)-piridint adunk. A reakcióelegyet egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. A Következő napon vett minta vékonyrégteg-kromatográflás analízise szerint (futtatószer: etil-acetát, lemez: szilánozott szllikagél) a reakció befejeződött. A rapa- 60 micin monopropionát-észter-hidrogén-klorid-só Rí- értéke 0,34 , míg a dipropionát-hidrogén-kloride - amely szintén keletkezik a reakcióelegyben 0,01. A diciklohexil-karbamidot leszűrjük és az oldószert rotációs vákuumbe párlóval eltávolítjuk. A nyersterméket 12 g szilánozott szilikagélen kromatografáljuk. Az oszlopon először 200 ml etil-acetátot folyatunk át, ezzel eltávolítjuk a rapamicin és a maradék diciklohexil-karabamidot. A terméket etil-acetáttal eluáljuk. 0,61 g cím szerinti észtert kapunk, a hozam 53%. A kapott vegyületet nehéz kristályosítani, és hosszabb időn át fénynek kitéve bomlik. NMR-spektruma (300 MHz, CDC13 oldószer) szerint a pro-drug spektruma gyakorlatilag azonos a rapamicinével. A propionátcsoport nem ad éles, könynyen felismerhető rezonanciát, a glicinátcsoporttal ellentétben. Ez annak köszönhető, hogy az etilcsoportból származó multipletteket nem lehet könnyen felismerni a rapamiclnből származó egyéb rezonanciák között. Széles csúcsok észlelhetők a 8 1,2 ppm és 51,5 ppm körül, amelyek a rapamicin spektrumában nem láthatók. A mono-(28)-N,N-dietil-amino-propionát-hidrogén-klorid pro-drug jellemzőit az alábbiakban ismertetjük. Fizikai tulajdonságok Molekulatömeg: 1077 Olvadáspont: 99 106°C Oldhatóság vízben: >50mg/ml Nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálat körülményei Oszlop: RP-18, 150 mm hosszú, 4,6 mm belső átmérőjű Előtét-oszlop: 50 mm hosszú, 4,6 mm belső átmérőjű Mozgó fázis: 87 tömegrész metanol és 13 tömegrész foszfát-puffer (0,025 mól/l, pH 3,4) elegye Detektor: Kratos 783 UV 254 nm 1,5 ml/perc 9,75 mlx Átfolyási sebesség: Retenciós térfogat: x ha új RP-18 oszlopot használunk, két csúcsot észlelünk, amelyek szintén a cisz-transz-izomereket jelenthetik, hasonlóan a glicinát-pro-dqig kromatogrammjához Kémiai stabilitás PH Hőmérséklet tudóra) 3,3 25,0 °C 3Í/.Í) 7,4 25,0 °C 17,0 3,3 37,5 “C 7,9 7,4 37,5 °C 6,3 Plazma/szövet stabilitási vizsgálat 37,5 °C-on Koncentráció (pg/ml) t,/2 (óra) A. Humán plazma 200 3,25 100 2,15 50 2,50 B. Patkány plazma 200 60,00 100 58,00 50 58,00 C. Májhomogenizátum 50 3,70 4
