198040. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kondenzált policiklusos imidszármazékok és hatóanyagként e vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 2 ha erre vonatkozóan külön megjegyzést nem teszünk a patkányokat lefejeztük és agyvelejüket eltávolítottuk. A különböző agyterületeket szétvágtuk, gyorsan lefagyasztottuk, és felhasználásuk időpontjáig -70 °C hőmérsékleten tároltuk. A liippokampális szövetet levágtuk, és jégben 40- szeres térfogatú pufferolrlattal (50 niM Tris-HCl, pH 7,7) (A puffer) 5-ös állású Polytron homogenizáló berendezésben háromszor, egyenként I5 másodperces időtartammal homogenizáltuk. A homogenízátumot ezután 20000 percenkénti fordulatszámmal (RC5-B, 50000 x g) centrifugáltuk, és a felülúszót elvetettük. A pelletet Ismét szuszpendáltuk 40 térfogat fenti pufferoldattal, és az endogén szerotonin eltávolítása céljából 37 °C-on 10 percig inkubáltuk. Ezután a homogenátumot a fentiek szerint centrifugáltuk, a felülúszót elvetettük, és a pelletet ismét szuszpendáltuk 100 térfogat pufferoldatban (50 inM Tris-HCl, pH 7,7, amely 0,l% aszkorbátot, I0 j/M pargilin és 4 mM kalcíum-kloridot tartalmaz.) (B puffer) és ultrahanggal kezeltük. Egy alikvot részt kivettünk a fehérje Lowry-nródszereivel való meghatározására, és a maradékot felhasználásának az időpontjáig -70 °C-on tároltuk. A homogenizátumot (50 n, mintánként 0,4- 0,6 mg fehérje) 100 pl (1,5 1,8 nM) 3 H-8-hidroxi-2- (di-n-propil-amíno)tetralínnal 2 ml pufferoldatos végtérfogatban 37 °C-on 10 percig Inkubáltuk. Az inkubálás befejezte után 3 ml hideg A pufferoldatot adtunk minden egyes próbacsó'be és tartalmát Wahtman GFfB üvegszűrőn szűrtük. Ezután a szűrőket gyorsan mostuk kétszer 3 ml azonos pufferoldattal, majd szcintillációs koktéllal ráztuk, majd Packard 460 CD műszerben szcintillációs számlálást végeztünk. Minden egyes kezelés esetére kiszámítottuk a specifikus kötődést, amelyet az összes kötődés és a fölöslegben (1 pM) jelenlévő, nemjelzett szerotonin jelenlétében végbemenő kötődés különbségeként definiáltunk. A csupán vivőanyaggal kezelt patkányokon kapott specifikus kötődés értékét összehasonlítottuk a vizsgálati vegyület egy vagy több dózisával kezelt állatokon kapott értékkel, és ezt a kontrollérték százalékában fejeztük ki. Az így kapott eredményeket a kötődés százalékos értékének a vizsgálati hatóanyag koncentrációja logaritmusának a függvényében ábrázoltuk. Így a lineáris regressziós analízissel egy egyenest kaptunk 95%-os megbízhatósági határokkal, amelyből inverz (megfordított) előjelzéssel kaptuk az 1CS0 értéket. A vizsgálati hatóanyag gátlási állandóját (Kj értékét) az alábbi képlettel számítottuk ki: IC»o K,--------------------------------^ [3 H-8-OH-DPAT] ahol Kd - 1,8 nM a 8-OH-DPAT (8-hidroxi-2-(di-n-propil-amino)-tetralin) kötődés esetén. A vizsgálati anyag több dózisszintjének az alkalmazása lehetővé tette az lD50-érték kiszámítását: ez az az adag, amely ex vivo mérés során a specifikus kötődést 50%-ban gátolja. A fenti feltételek mellett a buspiron (30 mg/kg tdagban) a hippokampális membránokról a specifikusan kötött *11-8-OH-DPAT 46%-át leszorította. A vizsgálat során a találmány szerinti vegyületek az alábbi eredményeket adták: 4. táblázat A vegyületet leíró Gátlási állandó példa sorszáma ICj nM 1. 162,0 3. 17,0 7. 13,9 8. 122,0 14. 74.0%-os gátlás IjuM-nál 17. 1.1 22. 12,0 23. 107.0 24. 46,0%-os gátlás I/uM-nál 25. 68.0%-os gátlás ljiM-nál 28. 41,0 Az eredmények azt mutatják, hogy a találmány szerinti vegyületek mérsékelttől rendkívül erős mértékig terjedő affinitással rendelkeznek az 5-HT-1A receptoron való kötődéshez, ez arra utal, hogy szorongásoldó hatásuk valószínűsége igen nagy. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás az (1) általános képletö vegyületek — ahol R jelentése -CHR'-CHR2- általános képletű cső port, ahol R* 1 és R2 együttes jelentése (II) vagy (IV) általános képletű csoport, R3 jelentése adott esetben egy halogénatomma! vagy trifluor-metil-csoporttal helyettesített 2-piridil-, 2-pirfmidiniI-, 2-pírazinil- vagy 3-piridazlnil-csoport, azzal a megkötéssel, hogy R1 jelentése adott esetben helyettesített 2-piridil- vagy 2-pirimidinil-csoporttól eltérő, ha R1 és R2 együttes jelentése olyan (II) általános képletű csoport, amelyben X metiléncsoportot vagy -CHjCHj-csoportot jelent, Y jelentése -(CH2)0- általános képletű csoport, X jelentése 1—4 szénatomos alkiléncsoport, o értéke 1 vagy 2, p értéke 0,- - - egyszeres vagy kétszeres kötés, m értéke 2, 3 vagy 4, és n értéke 1, 2 vagy 3 -és gyógyászati szempontból elfogadható savaddidós sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy - rövidség céljából az (V) általános képletű csoportot az alábbiakban A1 szimbólummal és a (VI) áltlaános képletö csoportot A2 szimbólummal jelölve, ahol a képletben R3, n és R jelentése a tárgyi körben megadott — egy A1 H általános képletű vegytiletet vagy annak valamilyen sóját egy A2-(CH2) -Z1 általános képletű vegyülettel - ahol Z1 kilépő csoportot, például halogénatomot, így klór- vagy brómatomot, vagy valamilyen szerves szulfonil-oxi-csoportot, például metánszulfonil-oxi- vagy tozil-oxi-csoportot jelent — alkilezünk, és kívánt esetben 98.040 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 10
