198021. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antiallergiás és antitrombotikus hatású heterociklusos vegyületek előállítására
1 2 IÖ8.02I zisét jelentős mértékben gátolják. 5. példa 5 ín vivo vizsgálatot végeztünk a találmány szerint előállított vegyüieteknek tengerimalacok exogén úton beadott C4 és/vagy D4 Ieukotriénnel kiváltott hörgőgőrcse gátlásának mérésére. A vizsgálattal lényegében a vegyúletek SRS-A antagonista tulaj son ságait mérjuk. 'IO A vizsgálatot a következő módon végezzük: 350 b00 g testtömegű Hartley törzsbe tartozó, hím tengerimalacokat 50 mg/kg i.p. pentobarbitalnátriummal anesztetizálunk. A nyaki vénába kanült helyezünk a gyógyszerek beinjektálására, a nyaki aor- ^ g tán pedig a vérnyomás nyomon követésére. A légcsövekbe is kanült vezetünk a mesterséges levegőztetés biztosítására, amit kis méretű StarÜng szivattyúval végzünk, valamint a légzéstérfogat-változás indirekt mérésére, amint azt a leírás más helyén leírjuk. További 15 mg/kg pentorbarbital-nátriumot adunk 20 az állatoknak intravénásán, a spontán légzés felfüggesztésére. A leukotrién dózisszint változtatásával szubmaximális hörgőösszehúzódási válaszreakciót váltunk ki. Az intravénásán beadott LTC4 dózisszintje 1-2 #rgfkg, az LTü4-é 0,3 I pig/kg. Acroszolos beadás esetén az LTC4 hörgő-provokáló dózisa 1,6 25 pmolfl-es oldat, az LTD4-é 2,0 jrmol/l-cs oldat. A vizsgálandó anyagokat intravénásán, gyomorba vagy aeroszolként vagy orálisan adjuk be mielőtt a hörgőgörcsöt az előre meghatározott dózis-szintű LTQ vagy LTD4 adagolással kiváltanánk. Az oldható hatóanyagokból vagy leukotríénekbő] ultra- 30 hangos porlasztó (Monaghan) 10 másodpercen át való működtetésével készítünk aeroszolokat. Az aeroszollá alakított oldható hatóanyagok dózisát az oldat koncentrációjával és egy adott aeroszol-alkalmazási időtartam (közelítőleg 10 s) megjelölésével ad- «c juk meg. A kontroli-állatoknak a hatóanyag helyett sóoldatot adunk. A légzéstréfogat változását kalibrált dugattyúval határozzuk meg, a dugattyú elmozdulását lineráis transzduktor útján Beckman Dynograph regisztrálókészülékre visszük és azon regisztráljuk. A legnagyobb hörgőösszehúzódási térfogatot a kísérlet végén a légcső rögzítésének feoldásával határozzuk meg. Az 3. és 5. perces átfolyási térfogatokat a regisztrátum-görbéből olvassuk le. Az 1., 3. és 5. perces átfolyási térfogatot a maximális hörgőösszehúzódás%-ában fejezzük ki. A hatóanyagok gátló hatásának kifejezésére valamennyi időtartományra a megfelelő csoportok átlagértékeit adjuk meg. A statisztikus szignifikancia megállapítására párosításán adatok Student-próbáját használjuk. Felveszszük a dózis-hatás görbét és a regressziós egyenesből interpoláljuk az ED50 értéket. A találmány szerint előállított vegyületekkel kapott eredményeket —a hörgőgörcs kiváltására LTD4-t alkalmazva - a III. táblázatban ismertetjük. Hl. táblázat A vizsgált vegytileteketlO perccel a hörgőösszehúzódás kiváltását megelőzően adjuk be. Az előállítási Dózis (mg/kg) % Gátlás példa száma (intraduodcnális) (statisztikus átlag) 1. perc 3. .perc__2L .„ perc 1A 50 88 86 81 1B 50 08 41 41 IC 50 61 41 53 Két másik, a találmány szerint előállított vegyületet Is vizsgáltunk a fenti módszerrel, az 1., 3. és 5. perces átfolyási értékek felhasználásával. A következő egyenletek szerint fejeztük ki az eredményeket: A térfogat átfolyás görbe alatti területet (AUC) az 1, 3 és 5 perces átfolyási értékek alkalmazásával becsüljük meg, és a maximális átfolyás AUC%-ában kifejezve adjuk meg (/!/ egyenlet). 3(1 perc)* 4(3 perc)+ 2(5 perc) % max AUC = ---------------------------------------x 100 1/ 10(max) A szerek hatását a megfelelő kontroll állatokon kapott % max AUC érték /Cos gátlásával jellemezzük (\2j egyenlet). % max AUC kontroll — % max AUC kezelt % gátlás -------------------------------------------------------------x 100 2/ % max AUC kontroll A statisztikus szignifikancia meghatározására párosítatlan adatok Student-t-próbáját használjuk (p < 55 0,05). Az ICjo értéket a 10%-os és 90%-os gátlásnak megfelelő pontok közötti lineáris regressziós egyenesből határozzuk meg. Eeredményeink a következők: A vizsgált vegyületeket a hörgőösszehúzódás kiváltása előtt 10 perccel adtuk be. 60 Az előállítási Dózis A max AUC példa száma mg/kg %-os gátlása (intraduodenális) 1D 50 13 Egy másik, a találmány szerinti előállított vegyületre kapott eredmény a következő: Az előállítási Dózis % gátlás ICjo mg/kg példa száma mg/kg 2 ió** 98 0,1 ** a gyomorba beadva 6
