197941. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A42125 jelű antibiotikum előállítására
197941 Az A42125 antibiotikus antimikrobális hatásának egyik fontos jellemzője az anaerob baktériumokkal szembeni MIC értékeket a VI. táblázatban foglaltuk össze. A MIC értékeket ez esetben is az agar-hígításos módszerrel határoztuk meg. A végpontokat 24 órás inkubálás után olvastuk le. VI. TÁBLÁZAT Anaerob baktériumok Á42125 antibiotikummal szembeni érzékenysége________ 17 Anaerob baktériumok___________MIC (mcg/ml) Clostridium difficile 2994 4 Clostridium perfringens 81 4 Clostridium speticum 1128 4 Eubacterium aerofaciens 1235 4 Peptococcus asaccharolyticus 1302 64 Peptöcoccus prevoti 1281 4 Peptrostreptococcus anaerobius 1428 8 Peptrostreptococcus intermedius 1624 4 PRopionibacterium acnes 79 8 Bacteroides fragilis 111 >128 Bacteroides fragilis 1877 >128 Bacteriodes fragilis 1936B >128 Bacteriodes thetaiotaomicron 1438 128 Bacteroides melaninogennicus 1856/28 64 Bacteroides melaninogennicus 2736 128 Bacteroides vulgatis 1211 128 Bacteroides corrodens 1874 >128 Fusobacterium symbiosum 1470 >128 Fusobacterium necrophorum 6054A ^0,5 Egy további fontos antimikrobiális tulajdonsága az A42125 antibiotikumnak, hogy gátolja a metánképző baktériumok növekedését. így például az A42125 antibiotikum milliliterenként 0,1 meg koncentrációnál gátolja a Methanococcus vanniellit; a vizsgálatban egy A42125 antibiotikum kristályt helyezünk a minimál táptalajon kinőtt 24 órás egyenletes tenyészetre, és a gátlást a harmadik napon mértük. Az A42125 antibiotikum további fontos tulajdonsága, hogy javítja az állatok tápanyaghasznosítását. így például fokozza a kérődzők tápanyaghasznosítását. A tápanyaghasznosítást a bendőben történő propionát termeléssel és a propíonátok koncentrációjával fejezhetjük ki. A bendőnedvet egy sebészeti úton elhelyezett fisztulán keresztül kaphatunk egy ökörből. Az ökröt az alábbi összetételű, magas rosttartalmú takarmányon tartottuk: 69,95% durván őrölt kukorica 10% őrölt kukoricacsutka 8% szójaliset (50% protein) 5% lucernaliszt 5% melasz 0,6% karbamid 0,5% dikálcium-foszfát 0,5% kálcium-karbonát 0,3% só 0,07% A és D2 vitamin premix 0,05% E vitamin premix 0,03% nyomelem premix A bendőnedvmintát négyszeres rétegű sajtborító vásznon szűrjük át, és a szűrletet vákuumedénybe gyűjtjük. A szűrőrétegen viszszamaradt szilárd részecskéket annyi fiziológiás pufferben szuszpendáljuk fel, mint amennyi az eredeti térfogata volt, majd a szuszpenziót újra leszűrjük. Az alkalmazott puffer összetétele a következő [Cheng és munkatársai, J.Dairy Sei., 38: 1225 (1955)]: 0,316 g dinátrium-hidrogén-foszfát 0,152 g kálium-dihidrogén-foszfát 2,260 g nátrium-hidrogén-karbonát 0,375 g kálium-klorid 0,375 g nátrium-klorid 0,112 g magnézium-szulfát 0,038 g kálcium-klorid 0,008 g vas (II)-szulfát-7-víz 0,004 g mangán(II)-szulfát 0,004 g cink-szulfát-7-víz 0,002 g réz-szulfát-5-víz 0,001 g kobalt klorid 1 liter bízben oldva. A két szűrletet választótölcsérbe öntjük és állni hagyjuk, amíg a lebegő részecskék a folyadék tetején össze nem gyűlnek. A tiszta fázist elválasztjuk, ugyanazzal a pufferrel 1:1 arányban hígítjuk, és a kémhatást pH=7 értékre állítjuk be. 40 mg fent ismertetett takarmányra egy 25 milliliteres lombikban rámérünk 10 ml hígított bendőnedvet. Az edénybe bemérünk 5 mg szójabab proteint is. A vizsgálandó vegyületet négy párhuzamosban mérjük be az edényekbe. Ugyancsak beállítunk kétszer négy kontrolledényt is. Az egyik kontroll a nullidős, a másik a tizenhatórás. Valamennyi vizsgálati edényt 38°C hőmérsékleten 16 órán keresztül inkubáljuk. Az inkubációs idő végén megmérjük a kémhatást, és 2 ml 25°C-os metafoszforsavat adunk mindegyik edénybe, a keveréket hagyjuk leülepedni, és a felülúszó illékony zsírsavait gázkromatográfiával elemezzük. A mintákban az acetát, propionát és a butirát tartalmat határozzuk meg. Az eredményeket statisztikusan hasonlítjuk össze a kontrollok értékeivel. A kezelések közül azokat tekintjük aktívaknak, melyeknél a propionát keletkezése lényegesen magasabb, mint a kontroliedényben. A VII. táblázatban összefoglaljuk az A42125 antibiotikummal kezelt edények és a kontrolijaik illékony-zsírsavkoncentrációinak arányait. 18 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 10
