197941. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A42125 jelű antibiotikum előállítására
197941 19 VII. táblázat 20 Az A42125 antibiotikum hatása (öt a kérődzők kísérlet) tápanyaghasznosítására dózis mcg/ml mól% propionat mól% acetat nól% butirat összes zsírsav/kontroll zsírsav: mmól/liter 20 1,283 0,914 0,608 0,921 5 1,237 0,877 1 ,019 0,988 5 0,959 0,992 1,075 0,921 1 1,122 1,015 0,795 1,237 5 1,118 0,915 0,867 1,041 1 1,105 0,881 1,111 0,997 5 1,778 0,896 0,654 0,921 1 1,458 0,915 0,823 0,858 A metánképzés gátlása ugyancsak hozzájárul a jobb tápanyaghasznosításhoz, minthogy az acetát hasznosítható energiává alakul és nem metánná, ami elvész. Ezt az aktivitást in vitro vizsgálatokban mérhetjük, 35 melyek a bendőben lezajló folyamatokat utánozzák. A vizsgálatokat edényekben végzett folyamatos fermentációval végezzük, melyek a bendőben hosszú időtartam alatt lejátszódó folyamatokat modellezik. A légmentesen le- 40 zárható edények folyadék- és szilárdanyag-bevezetővel, mintavevő nyílással és gumiballonba vezető gázelvezetővel vannak ellátva. A gumiballonban fogjuk fel a fermentáció alatt keletkező gázokat. Az edények folyadéktartalmát 500 ml-en tartjuk egy foiya- 45 dékgyüjtőedénybe vezető függőleges túlfolyócsővel. Az edényeket 38—40°C hőmérsékleten tartjuk. Mindegyik edényt lassan kevertetjük mágneses keverővei. gQ A kísérleteket azzal kezdjük, hogy a teszteknél alkalmazott táplálékkal etetett ökrökből a fisztulán át nyert szűrt bendőnedvből 500 ml-t mérünk az egyes edényekbe. Előze- g5 tesen 50 ml hígított metafoszforsavat töltünk a kifolyóedénybe, hogy a fermentációs edényből túlfolyó folyadékban ezzel leállítsuk a fermentációt. A fermentációs edényt lezárjuk, és hozzácsatlakoztatjuk a gázgyűjtőballont. 60 Mindegyik edénybe napi egy liter, alábbi összetételű puffert csepegtetünk folyamatosan: nátrium-hidrogén-foszíát 2,2 g magnézium-klorid 0,036 g 65 nátrium-hidrogén-karbonát 5,9 g kálium-klorid 0,34 g nátrium-klorid 0,28 g karbamid 1,0 g kálcium-klorid 0,024 g víz 1 liter pH=6,8—7,0 Mindegyik edénybe naponta kétszer 10 g táplálékot adunk az adagolónyíláson keresztül. Az adagolások után a gázelvezetőt elzárjuk és az edényt széndioxiddal kiöblítjük. Naponta összegyűjtjük és analizáljuk az elfolyó folyadékot és az eltávozó gázt. Általában az edényeket négy napig inkubáljuk, mielőtt a vizsgálandó vegyületet hozzáadnánk. Négynapos ekvilibrálás után megkezdjük az elmenő folyadék és gáz analízisét, anélkül, hogy hozzáadnánk a kísérleti vegyületet. Az ínkubálást addig folytatjuk, amíg az analitikai eredmények viszonylag állandóvá nem válnak. Ekkor megkezdjük a kezelt táplálék adagolását, és a fermentációt a kezelt táplálékkal folytatjuk 7 napon keresztül. A vegyületet olyan mennyiségben adjuk a táplálékhoz, hogy az edényben lévő 500 ml folyadékban a vegyület koncentrációja a VIII. táblázatban megadott értékeket érje el. Legtöbb esetben két párhuzamos vizsgálatot futtatunk, és az egyes fermentációs edényeknél kapott eredményeket átlagoljuk. A VIII. táblázatban összefoglaljuk az A42125 antibiotikum metánképződést gátló aktivitását. 11
