197929. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ciklikus dezprolin-vazopresszin vazopresszin-antagonista vegyületek és a fenti vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

197929

2,54 g Pmp-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Arg-Gly -BHA-gyantát (védett peptid-gyantát) — melyet a fent ismertetett módon 0,72 mmól/g amin-gyanta (N2-analízis) és 0,46 mmól/g Boc-Gly (aminosav-analízis) összekapcsolásával állítottunk elő, Beckman 990 B peptid-szintetizátorban — 2-3 ml anizol jelenlétében 0°C-on egy órán át 20 ml vízmentes hidrogén-fluoriddal reagáltatunk. A hidrogén-fluoridot vákuumban ledesztilláljuk, és a száraz maradékot vízmentes dietil-éterrel kezeljük. A nyers peptidet 100 ml dimetil-formamiddal és 100 ml 40%-os ecetsavval 3,5 1 légtelenített vízbe extraháljuk, amelynek pH- ját előzőleg 4,5-re állítottuk. A híg vizes oldatban lévő dimerkapto-oktapeptidet 0,01 mól/l koncentrációjú kálium- [ferri-cianid] -oldattal pH 7,2 értéken oxidálva ciklizáljuk, míg az oldat színe 30 percen át megmarad. Az oxidációs reakció befejeztével az oldat pH-ját jégecettel 4,5-re állítjuk. A kapott oldatot gyengén savas akrilgyantával (Bio-Rex 70) töltött oszlopon (2,5X10 cm) lassan átfolyatjuk. Az oszlopot piridin-acetát-pufferrel (30: :4:66) arányú piridin-ecetsav-víz elegy) eluáljuk. A piridin-acetát-oldatot vákuumban eltávolítjuk és a maradékot 10%-os ecetsavból liofilizáljuk. 560 mg (83,73%) cím szerinti nyers peptidet kapunk, melyet az alábbiak szerint tisztítunk.

1) Ellenáramú megoszlás (CCD)

minta: 560 mg, n-butanoi-ecetsav-víz (4:1: :5), 240 frakció

a) 136—150. frakció: 115,75 mg termék

b) 128—135 és 151 —160. frakció:

124,87 mg termék

c) 121 —127 és 161—200. frakció:

122,00 termék

Fizikai adatok:

molekula összegképlete: C46H65N|3OnS2 relatív móltömeg : 1039,437 aminosav-analízis :Asp (1,00), Glu

(1,00), Gly (1,00) Cys (0,38), Tyr (0,73), Phe (0,99) Arg (1,02)

peptid-tartalom : 87,04% (aminosav-analízis) 85,23% (^-analízis).

Kromatográfiás adatok: Vékonyréteg-kromatográfia (TLC)

eluens: butanol-ecetsav-víz-etil-acetát (1:

1:1:1)

Rf : 0,53;

eluens: butanol-ecetsav-víz-piridin (15:3: :3:10)

Rf : 0,57

Nagynyomású folyadékkromatográfia (HPLC

a) izokratikus elúció

eluens: 0,1%-os trifluor-ecetsav-acetonitril (75:25)

K’ : 3,73(

b) gradiens elúció

eluens: 0,1%-os trifluor-ecetsav-aceto-13

nitril (80:20—50:50, 10 perc

alatt)

K’ : 3,93

Gyors atomokkal való bombázás (FAB): (M+H)+ 1040-nél (M—H)~ 1038-nál.

6. példa

Pmp-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-ArgNH2 előállítása

2,10 g Pmp-Tyr-Phe-GIn-Asn-Cys - Arg-BHA-gyantát (védett peptid-gyanta formájában) — melyet a fent leírt módon 1,0 mmól/g amin-gyanta (N2-analízis) és 0,732 mmól/g Boc-Arg(Tos) (aminosav-analízis) összekapcsolásával állítottunk elő, kézi rázással — 30 ml vízmentes hidrogén-fluoriddal reagáltatunk, 3,0 ml anizol jelenlétében, 0°C-on, 60 percen át. 350 mg (48,67%) cím szerinti nyers peptidet kapunk, melyet az alábbiak szerint tisztítunk.

1) Ellenáramú megoszlás (CCD)

minta: 350 mg, n-butanol-ecetsav-víz (4:1: :5), 240 frakció

a) 132—154. frakcióból 122,43 mg termék

b) 126—131 és 155—170. frakcióból 75,43 mg termék

2) Gélszűrés

0,2 mól/l koncentrációjú ecetsav, 85 mg minta (la. lépésből)

a) frakció: 27,73 mg tiszta termék

b) frakció: 51,55 mg

Fizikai adatok:

molekula összegképlete: C44H62N12Ol0S2 relatív móltömeg : 982,416 aminosav-analízis : Asp (1,00), Glu

(1,03), Cys (0,46) Tyr (0,77), Phe (0,99), Arg (0,94) peptid-tartalom : 72,8% (aminosav-analízis)

85,52% (N2-analízis)

Kromatográfiai adatok: Vékonyréteg-kromatográfia (TLC)

eluens: butanol-ecetsav-víz-etil-acetát (1:

: 1:1:1)

Rf : 0,71;

eluens: butanol-ecetsav-víz-piridin (15:3: :3:10)

Rf : 0,48

Nagynyomású folyadékkromatográfia

a) izokratikus elúció

eluens: 0,1%-os trifluor-ecetsav-acetonitril (70:30)

K’ : 1,4 ‘

b) gradiens elúció

eluens: 0,1%-os trifluor-ecetsav-acetonitril (80:20—50:50, 15 perc

alatt)

K’ : 5,07

Gyors atomokkal való bombázás (FAB): (M-fH) + 983-nál (M—H)~ 981-nél.

14

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

8