197929. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ciklikus dezprolin-vazopresszin vazopresszin-antagonista vegyületek és a fenti vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
197929 15 7. példa Pmp-D-Tyr-Phe-Val-Asn-Cys-ArgNH2 előállítása 4,0 g Pmp(4-MeBzl)-D-Tyr (Br-Z) - Phe-Val-Asn-Cys (4-MeBzl) -Arg(Tos) -gyantát — melyet az I. példában leírt módon állítottunk elő — 4,5 ml anizolban 0°C-on egy órán át 40 ml vízmentes hidrogén-fluoriddal kezelünk. A reakcióelegyet vákuumban szárazra pároljuk, majd a maradékot vízmentes éterrel kezeljük és extraháljuk. 1,30 g nyers pepiidet kapunk. A kapott, védőcsoportot nem tartalmazó heptapeptidet 0,01 mól/1 koncentrációjú kálium- [ferri-cianid] -oldattal pH 7—7,5 értéken ciklizáljuk, míg az oldat színe 30 percen át állandó marad. A cím szerinti terméket a fent leírt módon izoláljuk és tisztítjuk. 8. példa Pmp-D-Tyr (Et)-Phe-Val-Asn-CysO H előállítása és felhasználása a 2. példa címvegyületének előállítására 4,87 g (15 mmól) Boc-Cys(4-MeBzl)-t 30 ml etanolban oldunk és hozzáadunk 10 ml vizet. A pH-t ezután vizes cézium-hidrogén - -karbonát-oldattal 7,1-re állítjuk. Az elegyet koncentráljuk és a maradékot háromszor bepároljuk 50 ml toluolból. A kapott maradékot szobahőmérsékleten egy éjszakán át nagyvákuumba helyezzük. A sót 35 ml dimetil-formamidban oldjuk és hozzáadunk 5 g kereskedelmi forgalomban kapható klór-metil-íenil-gyantát. Az elegyet 53°C-on egy éjszakán át argonatmoszférában keverjük. Az elegyet szűrjük és a gyantát ötször 60 ml dimetil-íormamiddal, ötször 60 ml 9:1 arányú dimetil-formamid—víz eleggyel, ötször 60 ml dimetil-formamiddal és hatszor 60 ml etanollal mossuk. Ezután nagyvákuumbart egy hétvégén át szobahőmérsékleten szárítjuk. A peptidláncot Boc-Asn-ből, Boc-Val-ból, Boc-Phe-ből, D-Tyr(Et)-ből, és S-(4-MeBzl)-Pmp-ből építjük fel, Beckman-féle peptidszintetizátorban. A gyantát eltávolítjuk és kézi rázóba helyezzük. 0,86 g peptid-gyantát 1,5 ml anizollal kehelünk és 60 percen át 0°C-on 15 ml hidrogén-fluoriddal keverjük. A hidrogén-fluoridot ezután vákuumban, (víz-légszivattyú) 0°C-on eltávolítjuk. A maradékot háromszor 25 ml éterrel mossuk (a mosófolyadékot elöntjük) és a pepiidet négyszer 10 ml dimetil-formamiddal és 30%os ecetsavval eluáljuk. Az oldatot 2 I gázmentesített vízhez adjuk és a pH-t ammónium-hidroxid-oldattal 7,0-ra állítjuk. Lassan hozzáadunk 35 ml 0,01 mól/l koncentrációjú kálium-ferri-cianid-oldatot. A pH-t ezután ecetsavval 4,5-re állítjuk és az elegyet 30 percen át 25 g nedves enyhén bázikus ioncserélő gyantával (Ag-3X4 IR-4S) 16 keverjük. A szuszpenziót szűrjük és a gyantát kétszer 400 ml 30%-os ecetsavval mossuk. A szürletet ezután C-18 oszlopon (7X X16 mm) gyorsan átvezetjük. Az oszlopot háromszor 400 ml vízzel mossuk, majd a pepiidet 50:50:0,25 arányú acetonitril-víz-trifluor-ecetsav eleggyel eluáljuk. A 30—36. frakciókat egyesítjük, koncentráljuk és liofilizáljuk. 25 mg cím szerinti szabad CysOH-végü ciklusos köztiterméket kapunk. FAB tömegspektrum glicerinben: (M+H)+ 827-nél (M-Hp 825-nél. 20 mg fenti Cys-savat egy ekvivalensnyi Arg-GlyNH2.HCl-dal reagáltatunk DCC és HBT jelenlétében, dimetil-formamidban, ily módon a 2. példa címvegyületéhez jutunk. A Cys-savat Arg(HCl) (OMe)-ve! reagáltatva majd az észtercsoportot enyhe körülmények között hidrolizálva a 4. példa címvegyüietének sav formáját kapjuk. A fenti vegyületet kívánt esetben káliumsója formájában is izolálhatjuk. 9. példa Az 1. és 2. példában leírtak szerint eljárva, de a 8. egységet képező L-Arg(Tos) helyett DArg(Tos)-t használva Pmp-D-Tyr(Et)-Phe-Val-Asn-Cys-D-Arg-GIyNH2-t állítunk elő. A 4. egységet képező Va‘l-t szubsztituálat!an Gin nel helyettesítve, HBT jelenlétében Pmp-D-Tyr(Et)-Phe-Gln - Asn - Cys - Arg - GlyNH2 pepiidet állíthatunk elő. Az 1. és 2. példában leírtak szerint eljárva, de a reakciósorban 8. aminsavként Boc-Lys-t használva Pmp-D-Tyr(Et)-Phe-Val-Asn-Cys-Lys-GlyNH2 pepiidet kapunk. Az 1. és 2. példa szerint eljárva, de Pmp helyett ß-(S-benzil-merkapto-ß,ß-ciklotetra - metilén) -propionsavat használva Tmp'-D-Tyr(Et)2-származékot állítunk elő. 10. példa A 4. példa szerinti eljárással, CMR-gyantát használva, és 7. aminosavként D-Arg(Tos)-t alkalmazva Pmp-D-Tyr (Et)-Phe-Val - Asn--Cys-D-ArgOH-t kapunk. A 3. példában leírtak szerint eljárva, de CMR-gyantát és 7. aminosavként L-Lys(Boc) -T" ot használva állítjuk elő a Pmp>-D-Tyr(Et)---------------------1-Phe-Val-Asn-Cys-L-LysOH peptidet. A 3. példa szerinti eljárásai, de 4. aminosavként Gln-t és HBT-t használva Pmp-Tyr- * 9 -Phe-Gln-Asn-Cys-ArgNH2 peptidet kapunk. 9 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
