197929. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ciklikus dezprolin-vazopresszin vazopresszin-antagonista vegyületek és a fenti vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

197929

i U

és egy éjszakán át vákuumban szárítjuk. 0,87 g (Y=Abu) és 0,67 g (Y=Val) cím szerinti köztiterméket kapunk, az utóbbit a

4. példában használjuk kiindulási anyagként.

Pmp-D-Tyr(Et)-Phe-Abu-Cys-ArgNH2 előállítása

0,87 g Pmp (4-MeBzl) -D-Tyr (Et) -Phe- Abu-Asn-Cys(4-MeBzl)-Arg(Tos) -BHA-gyantát

2.ml anizolban 0°C-on 50 percen keresztül 20 ml vízmentes hidrogén-fluoriddal reagáltatunk. A reakcióelegyet vákuumban szárazra pároljuk, a maradékot vízmentes éterrel kezeljük és a nyers peptidet 50 ml dimetil-formamiddal és 60—70 ml 33%-os ecetsavval két liter vízbe extraháljuk. A híg vizes oldatban lévő dimerkapto-heptapeptidet 0,01 mól/1 koncentrációjú kálium- [ferri-cianid] -oldattal ciklizáljuk pH 7,2 értéken, míg a szín 30 percen át megmarad (kb. 30 ml). Az oxidációs reakció befejeztével az oldat pH-ját jégecettel

4,5-re állítjuk. Az oldatot enyhén savas akrilgyantával (Bio-Rex 70) töltött oszlopon (2,5X13 cm) lassan átfolyatjuk. Az oszlopot piridin-acetát-pufferrel (30:4:66 arányú piridin-jégecet-víz) eluáljuk. A piridin-acetát-oldatot vákuumdesztillálással eltávolítjuk és a maradékot 10%-os ecetsavból liofilizáljuk. 115 mg (33%) cím szerinti nyers peptidet kapunk, melyet az alábbi módon tisztítunk.

1) Megoszlásos oszlopkromatográfia: Sephadex G-25

minta: 115 mg, n-butanol-ecetsav-víz (4:1: :5), 72,6 mg termék

2) Gélszűrés G-15

0,2 mól/1 ecetsav, 60,5 mg

3) Preparatív HPLC:

minta: 35,0 mg (2. lépésből) Altex ODS, 10 mmX25 cm, 5, áramlási sebesség: 4 ml/perc; víz-acetonitril-trifluor-ecetsav (60:40:0,25); izokratikus eluálás, 229 nm (2,0 AUFS) injektálás 4,14 mg/500 pl; 28 mg cím szerinti tiszta vegyületet izolálunk.

Fizikai adatok:

molekula összegképlete: c45h65h11o9s2 relatív móltömeg: 967,48

aminosav-analízis: Asp (1,00), Abu+

+Cys (1,35), Tyr (0,74), PHe (0,93 Arg (0,82)

peptid-tartalom: 65,6%.

Kromatográfiás adatok: Vékonyréteg-kromatográfia (TLC)

eluens: butanol-ecetsav-víz-etil-acetát (1:

: 1:1:1)

Rf : 0,63;

eluens: butanol-ecetsav-víz (4:1:5) (felső fázis)

R; : 0,51

Nagynyomású folyadékkromatográfia (HPLC) C-18 oszlop

a) izokratikus elúció

eluens: 0,05 mól/l-es kálium-hidrogén-foszfát-acetonitril (60:40)

K’ : 4,7

12

b) gradiens elúció

eluens: 0,05 mól/l-es kálium-dihidrogén-foszfát-acetonitril (80:2—50:50) K’ : 15,2

Gyors atomokkal való bombázás (FAB): (M+H)+968-nál (M—H)_ 966-nál.

4. példa

Pmp-D-Tyr(Et)-Phe-Val-Asn-Cys - Arg- NH2 előállítása

0,67 g 3. példa szerint előállított Pmp(4- -MeBzl)-D - Tyr(Et) - Phe-Val - Asn - Cys(4- -MeBzl)-Arg(Tos)-BHA-gyantát 2 ml anizolban 20 ml vízmentes hidrogén-fluoriddal reagáltatunk, 0°C-on, 50 percen keresztül. A reakcióelegyet a 3. példában leírtak szerint dolgozzuk fel. 80 mg (23%) cím szerinti nyers peptidet kapunk, melyet az alábbiak szerint tisztítunk.

1) Megoszlásos oszlopkromatográfia, Sephadex G-25:

minta: 80 mg, n-butanol-ecetsav-víz (4:1: :5), 75,7 mg termék

2) Preparatív HPLC:

minta: 42,7 mg (1. lépésből), Altex ODS, 10 mmX25 cm, 5, áramlási sebesség:

4 ml/perc; víz-acetonitril-trifluor-ecetsav (60:40:0,25); izokratikus elúció, 229 nm (2,0 AUFS), injektálás 4,7 mg/500 pl;

36,8 mg tiszta cím szerinti termék.

Fizikai adatok:

molekula összegképlete: ^■46^67^1 | 09S2 relatív móltömeg : 981,44

aminosav-analízis : Asp (1,06), Cys

(0,37), Val (1,00) Tyr (0,65), Phe (0,91), Arg (1,00 peptid-tartalom : 87,55%.

Kromatográfiás adatok: Vékonyréteg-kromatográfia (TLC)

eluens: n-butanol-ecetsav-víz-etil - acetát . (11:1:1)

R, : 0,6;

eluens: n-butanol-ecetsav-víz (4:1:5) (felső fázis)

R, : 0,516

Nagynyomású folyadékkromatográfia (HPLC) C-18 oszlop

a) izokratikus elúció

eluens: 0,05 mól/I-es kálium-dihidrogén - -foszfát-acetonitril (60:40)

K’ : 6,25;

b) gradiens elúció

eluens: 0,05 mól/l-es kálium-dihidrogén - -foszfát-acetonitril (80:20—50:50) K’ : 16,0

Gyors atomokkal való bombázás (FAB): (M+H)+ 982-nél (M—H)~ 980-nál.

5. példa

Pmp-Tyr- Phe-Gln-Asn-Cys-Arg-GlyNH2 előállítása

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

7