197928. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gonadorelin és gonadorelin-analóg hormonszintézis peptid köztitermékének racemátszegény előállítására
197928 30 ml 13%-os nátrium-klorid-oldattal, 150 ml 10%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldattal és 150 ml 5%-os nátrium-klorid-oldattal extraháljuk, vákuumban bepároljuk, kiszűrjük belőle a kivált nátrium-kloridot és a tömény szűrletet körülbelül 250 ml diizopropil-éterbe csöpögtetjük. Az elegyet ezután szűrjük, a csapadékot 30—40 ml diizopropil-éterrel mossuk, majd foszfor-pentoxidon vákuumban szárítjuk. Ily módon 88%-os hozammal 13,1 g cím szerinti terméket nyerünk. [a]22=—33,7° (c=l, dimetil-acetamid). 1.5. példa Z-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt-Tos-OH előállítása MEPA eljárással Lényegében az 1.4. példában ismertetett módon járunk el, azzal az eltéréssel, hogy az összekapcsolandó peptideket 30—30 ml DMF-ban és vízben oldjuk, majd 5 ml DMF- dal hígított MEPA-t csepegtetünk hozzá, és a pH-t kb. 3 ml N-etil-morfolin hozzácsöpögtetésével 7,5-re állítjuk. Ily módon 63%-os hozammal 9,4 g cím szerinti terméket nyerünk. [a]p2=—30 (c=l, dimetil-acetamid). 9 1. összehasonlító példa Z-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt-HCl előállítása azid eljárással 50 g (83 mmól) Z-Trp-Ser-Tyr-N2H3-t 350 ml DMF-ban oldunk, az oldatot —30°C-ra hűtjük és 20 perc alatt hozzáfolyatunk 45 ml dioxános 8n hidrogén-kloridot, legalább —20°C hőmérsékleten újabb 20 perc alatt hozzáadunk 100 ml dioxánban oldott 12,5 ml butil-nitritet, majd az elegyet —20°C-on 20 percig keverjük, ezután —30°C-ra hűtjük és 45,7 ml N-etil-morfolint adunk hozzá. Az így készült azidoldathoz hozzáadjuk 55 g (61 mmól), 150 ml DMF-ban oldott H-D-Ser (But)-Leu-Arg-Pro-NHEt -2Tos-OH és 15,2 ml N-etil-morfolin reakcióelegyét. A reakcióelegyet ezután 5°C-ra melegítjük és az elegyet még 20 órán át keverjük. Ezután a reakcióelegyet 400 ml n-butanol és 4 1 25%-os nátrium-klorid-oldat között megosztjuk. A vizes fázist még háromszor 200 ml butanollal, majd az egyesített szerves fázisokat háromszor 200 ml 6,7%-os kálium-hidrogén-szulfát, 3,3%-os kálium-szuifát-oldat eleggyel extraháljuk. Ezután a szerves fázist még 200 ml 25%-os nátrium-klorid-oldattal, majd 200 ml 5%-os hidrogén-karbonát-oldattal extraháljuk. A butanolos fázist vákuumban bepároljuk, és ámég cseppfolyós koncentrátumot erős keverés közben 1 1 etil-acetátba adjuk. A leváló 'csapadékot kiszűrjük, majd 200 ml észterrel mossuk és vákuumban szárítjuk. Ily módon 73%-os hozammal 51,7 g cím szerinti terméket nyerünk. [a]p2=—31,8° (c=l, metanol). 6 2. példa Z-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-GIy-NH2-Tos-OH előállítása PPA eljárással 29,4 g (0,05 mól) Z-Trp-Ser-Tyr-OH-t és 42,08 g (0,05 mól) H-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2-2Tos-OH-t 200 ml DMF-ban oldunk, kb. +50C-ra hűtjük és 48,6 ml NEM-et adunk hozzá. Ezután kb. 20—30 percen belül 47,3 ml 50%-os metilén-kloridos PPA oldatot csepegtetünk hozzá, a reakcióelegy hőmérsékletét hagyjuk szobahőmérsékletre emelkedni, és a reakcióelegyet éjszakán át keverjük. A reakció lefolyását DC-eljárással, futtató elegyként butanol, jégecet, víz 3:1:1 arányú elegyét alkalmazva követjük nyomon. Az oldatot ezután kb. 100 ml-re pároljuk be, majd 600 ml butanolban vesszük fel és 2X150 ml 5%-os nátrium-karbonát oldattal, 150 ml 13%os nátrium-klorid oldattal, 150 ml 10%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldattal és 150 ml 5%-os nátrium-klorid-oldattal extraháljuk. A szerves fázist bepároljuk, a kiváló nátrium-klorid-sót kiszűrjük belőle és a 200 ml tömény oldatot 1,5 1 diizopropil-éterbe keverjük be. Szűrés és 200 ml diizopropil-éterrel történő mosás után a kapott csapadékot vákuumban foszfor-pentoxidon szárítjuk. Ily módon 89%-os hozammal 55,2 g cím szerinti terméket nyerünk. [a]2Z=—30,1° (c=l, metanol). 2. összehasonlító példa Z-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-GIy-NH2-Tos-OH előállítása azid-eljárással 57,7 g (95,8 mmól) Z-Trp-Ser-Tyr-N2H3-ot 400 ml DMF-ban oldunk, az oldatot —30°C- ra hűtjük, majd 20 perc alatt 43,5 ml dioxános 8n hidrogén-klorid oldatot engedünk hozzá, majd legalább —20°C hőmérsékleten újabb 20 perc alatt 125 ml dioxánban oldott 13,9 ml t-butil-nitritet adunk hozzá, majd az elegyet —20°C-on 20 percen át keverjük, ezután —30°C-ra lehűtjük és 50 ml N-etil-morfolint adunk hozzá. Az azidoldathoz ezután hozzáadjuk 70 g (83 mmól), 400 ml DMF-ban oldott H-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 • 2Tos-OH 30 ml N-etil-morfolin reakcióelegyét. A reakcióhőmérsékletet +5°C-ra emeljük és az elegyet még 20 órán át keverjük. Ezután a reakcióelegyet 400 ml n-butanol és 5 1 25%-os nátrium-klorid-oldat között megosztjuk. A vizes fázist még kétszer 200 ml n-butanollal mossuk és az egyesített szerves fázisokat 2X250 ml 8%-os hidrogén-karbonát-oldattal és 4X150 ml 13%-os nátríum-kjorid-oldattal extraháljuk. A butanolos fázist nátrium-szulfáton szárítjuk majd szűrjük. Ezután a butanolos oldatot 6 liter etil-acetátba keverjük, a leváló csapadékot kiszűrjük, majd 500 ml etil-acetáttal mossuk és vákuumban szárítjuk. Ily módon 71%-os hozammal 63 g cím szerinti terméket nyerünk. [a]p2=—31,8° (c=l, metanol) 10 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
