197926. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glikopeptid antibiotikumok kinyerésére
197926 sei az oldat térfogatát kb. 12 literre csökkentjük. Vizes sósav hozzáadásával a pH-t ismét 3,5—4-re csökkentjük és a kicsapódott fehér színű szilárd anyagot 3 órán át -|-50C-on való állás után összegyűjtjük. A szűrőlepényt acetonnal mossuk és a szuszpenziót ismét szűrjük. Szárítás után 74%-os kitermeléssel kapjuk a teikoplanint, amelynek HPLC tisztasága 83% (víz- és oldószer-tartalom 14,1%, szervetlen maradék 2,1%). 4. példa 450 g nyers deglükoteikoplanint — amelyet a 146053 sz. közzétett európai szabadalmi bejelentés egyik példája szerint állítottunk elő — 7 liter (pH 8-ra beállított vízben oldunk és az oldatot áteresztjük egy üvegoszlopon (17X100 cm), amely 26 liter Polyamide-PA 400-at (M. Woelm) tartalmaz. (A részecskenagyságot és más jellemzőket illetően 1. az előzőeket). 50 liter ionmentesített vízzel való mosás után az oszlopot 250 liter 9:1 arányú metanol/víz eleggyel eluáljuk, amely 0,035 tömeg/térf.% Na2C03-at tartalmaz. A hasznos frakciókat (100 liter) összeöntjük; az így kapott óidat az oszlopra felvitt deglükoteikoplanin 85%-át tartalmazza. Az oldatot ezután csökkentett nyomáson pH 6,5-en 9 liter maradék térfogatra betöményítjük. Lehűlés után a szuszpenziót szűrjük és a szűrőlepényt acetonnal mossuk. Szárítás után 211 g, 83%-os HPLC tisztaságú deglükoteikoplanint kapunk (víz- és oldószer-tartalom 12,2%); kitermelés 79%, a kiindulási HPLC aktivitásra vonatkoztatva. A deglükoteikoplanin fizikai-kémiai jellemzői 1) Ultraibolya spektrum abszorpciós maximumai: Xmax=279 nm (0,IN HCl-ban) ^ma*=297 nm (0,1N NaOH-ban) 2) Infravörös spektrum (nujolban) az alábbi fő abszorpciós maximumokkal (cm-1): 3250 (vNH; és fenolos vOH) 1645 (amid I) 1610 (vCOO-) 1595 (vNH3+) 1520 (amid II) 5 5. példa 96 g nyers L 17046 antibiotikumot — amelyet a 119574 sz. közzétett európai szabadalmi leírás szerint állítottuk elő (HPLC eredmény 68%) — 1 liter 95:5 (téri./téri.) víz/ /metanol elegyben pH 8,2-en oldunk és az oldatot egy üvegoszlopon vezetjük át (10X X100 cm), amely 5 liter Polyamide-SC 6-ot tartalmaz. 5 liter ionmentesített vízzel való mosás után az oszlopot 5 liter 1:1 (térf./térf.) víz/metanol eleggyel mossuk. Az eluálást 9:1 (térf./térf.) metanól/víz eleggyel végezzük, amely 0,03% (súly/térf.) Na2C03-at tartalmaz. A hasznos frakciókat — amelyek 53,9 g L 1,7046 antibiotikumot (a kiindulási . 11 HPLC aktivitás 83%-a) tartalmaznak, öszszeöntjük. A 4. példa szerinti eljárást követve 55,5 g, 89%-os HPLC tisztaságú L 17046 antibiotikumot kapunk (víztartalom 11%). Az L 17046 jelű antibiotikum fizikai-kémiai jellemzői 1) Ultraibolya spektrum abszorpciós maximumai: kmax=278 nm (0,1N HCl-ban) kmax=297 nm (0,1N NaOH-ban) kmax=277 nm (pH 7,4-es foszfát-pufferben) 2) Infravörös spektrum (nujolban) az alábbi abszorpciós maximumokkal (cm-1): 3700—2000, 2970—2850 (nujol), 1655, 1610, 1595, 1515, 1490, 1460 (nujol), 1375, (nujol), 1300, 1230, 1145, 1060, 1010, 890, 850, 820, 720 (nujol). 6. példa Az A 40926 antibiotikum komplexet tartalmazó fermentlevet — amelyet a 85112406.5 számú európai szabadalmi leírás szerint állítottunk elő — pH 8,5 és 10,5 között végzett szűréssé! megszabadítjuk a micélium-tömegtőj, rríájd a szürletet kénsavval pH 3-ra savanyítjuk meg. A kicsapódott nyers anyagot szűréssel összegyűjtjük, majd pH 7-en vízben oldjuk és felvisszük egy üvegoszlopra, amely Polyamide-SC 6AC-t (Macherey—Nagel & Co.) tartalmaz (120 liter gyanta/kg antibiotikum-aktivitás). Ionmentesített vízzel való mosás után 0,2M Ph 8 foszfát-pufferes mosást végzünk, a színező anyagok további eltávolítására. Egy másik megoldás szerint ugyanennek a célnak az elérésére kismennyiségű detergenst (pl. nátrium-lauril-szulfátot) tartalmazó vizet alkalmazhatunk. Az oszlopon megkötött anyagot ezután 1%-os vizes ammóniával eluáljuk; így a kiindulási antibiotikus aktivitás kb. 75%-át kapjuk meg. A vizes oldat pH-ját 10 (tömeg/térf.) %-os vizes HC1 hózzáadásával 3,5-re állítjuk be, majd néhány órán át 5°C-on tartjuk. A kicsapódott terméket szűréssel elkülönítjük, jeges vízzel alaposan mossuk, majd szárítjuk. HPLC alapján lényegében tiszta A 40926 antibiotikum komplexet kapunk. Egy további kísérletben, amelynek során a szűrt fermentlevet közvetlenül felvisszük az oszlopra, a pH 7-re való beállítása után 70% tisztaságú (HPLC) A 40926 antibiotikumot kapunk. Egy második átvezetéssel Polyamide-SC 6AC-n vagy egy adszorpció/deszorpció ciklussal egy affinitáskromatográfiás gyantán HPLC alapján tiszta anyagot kapunk. 7. példa 13,5 g nyers N63-(3-dimetil-amino-propil)-teikoplanin A2 amid-acetátot — amelyet a 86112226.5 sz. európai szabadalmi leírás 1. példája szerint állítottunk elő — 600 ml pH 6.5 vízben oldunk és az oldatot üvegoszlopon vezetjük át, amely 25Q g Polyamide-SC 6-12 7 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
