197771. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A 40926 antibiotikum komplex egyes fő komponensei arányának szelektív növelésére
A találmány az A, Bo, PA vagy PB faktorban dúsított A 40926 antibiotikumnak megfelelő prekurzorok alkalmazásával történő előállítására vonatkozik. Az A 40926 egy glikopeptid antibiotikum komplex, amelyet egy Actinomadura tenyészetből, nevezetesen az Actinomadura sp. ATCC 39727-ből izoláltak. A komplex összetevőit A,B,Bo (ez a B faktor fő komponense, annak kb. 90%-át alkotja), PA illetve PB faktornak nevezték el, melyeket a 177882 számú európai szabadalmi leírás ismertet. A szóbanforgó antibiotikum komplex, valamint egyedi faktorai — amelyek a D-alanil-D-alanin végződésű oligopeptidekhez kötődnek — elsősorban a Gram-pozítiv baktériumokkal és a Neisseriae fajtákkal szemben hatásosak. A találmány tárgya egyrészt eljárás az A faktor vagy a Bo faktor termelésének szelektív növelésére az A 40926 antibiotikum komplexben oly módon, hogy az A 40926-ot termelő mikroorganizmus törzshöz a fermentáció során hozzáadunk egy, a feldúsítani kívánt faktornak megfelelő prekurzort (elővegyületet). A találmány szerinti eljárással pl. egy ipari méretű fermentáció során megváltoztathatjuk az A 40926 antibiotikum fő komponenseinek arányát. Tehát ez a módszer felhasználható arra, hogy a végtermék összetételét az előírásoknak megfelelőre állítsuk be. Továbbá a találmány szerinti eljárással a termelő tenyészet fermentációs masszájából közvetlenül kinyerhetünk egy olyan nyers terméket, mely igen gazdag az A 40926 antibiotikum A vagy Bo faktorában, s ezt azután nagyobb kitermeléssel és kevesebb időt igénylő lépésekben tiszta anyag formájában is izolálhatjuk. A találmány további tárgya eljárás a PA vagy a PB faktor termelésének növelésére az A 40926 antibiotikum előállítása során. A 177882 számú európai szabadalmi leírásból ismert, hogy ez a két faktor az A 40926 antibiotikum A, ill. B faktorának természetes „prekurzora", mely azt jelenti, hogy bázisos körülmények között átalakulnak A, ill. B faktorrá. Tehát ha az antibiotikumok kinyerését korlátozottan bázisos körülmények között végezzük, azaz az antibiotikum kinyerése során a íermentlé szűrése és lűgoldatta 1 való eluálása után az eluátumot rövid időn belül semlegesítjük, akkor olyan komplexet kapunk, mely az A vagy a B faktor helyett PA vagy PB faktorban dúsított. Pontosabban a PA faktor termelésének növelésére szolgáló prekurzor azonos az A faktoréval, a PB faktor prekurzora pedig azonos a B-ével,il 1. Bo-éval. Az A 40926 antibiotikum komplexben a Bo faktor arányának növelésére szolgáló prekurzor lehet valin vagy annak olyan savakkal és bázisokkal képzett sói, melyek a termelő mikroorganizmusokra nézve nem toxikusak, alfa-keto-izovaleriánsav vagy annak olyan bázisokkal képzett sói, melyek a termelő mik1 2 roorganizmusokra nézve nem toxikusak, az alfa-keto-izovaleriánsavnak kis szénatomszámú mono- vagy polihidroxi-alkanolokkal képzett észterei, izovajsav vagy annak olyan bázisokkal képzett sói, melyek a termelő mikroorganizmusokra nézve nem toxikusak, az izovajsavnak kis szénatomszámú mono- vagy polihidroxi-alkanolokkal képzett észterei, továbbá izobutanol vagy annak olyan savakkal képzett észterei, melyek a termelő mikroorganizmusokra nézve nem toxikusak. Az A 40926 antibiotikum komplexben az A faktor arányának növelésére szolgáló prekurzor lehet n-propanol vagy a termelő mikroorganizmusra nem toxikus észterei; propionsav vagy a termelő mikroorganizmusra nézve nem toxikus bázisokkal képzett sói vagy kis szénatomszámú mono- vagy polihidroxi-alkanolokkal képzett észterei; izoleucin vagy annak a termelő mikroorganizmusra nézve nem mérgező savakkal vagy bázisokkal képzett észterei alfa-keto-béta-metil-valeriánsav vagy annak a termelő mikroorganizmusokra nem mérgező bázisokkal képzett sói vagy kis szénatomszámú mono- vagy polihidroxi-alkanolokkal képzett észterei, 2-metil-vajsav vagy annak a termelő mikroorganizmusokra nézve nem toxikus bázisokkal képzett sói vagy mono- vagy polihidroxi-alkanolokkal képzett észterei 2-metil-butanol vagy annak a termelő mikroorganizmusra nézve nem toxikus savakkal képzett észterei. A mikroorganizmusokra nézve nem toxikus bázisokkal képzett sók azok, melyek olyan típusú és koncentrációjú kationt tartalmaznak, hogy az a fermentációs masszában alkalmazott koncentrációban sem a mikroorganizmus-tenyészet növekedését, sem pedig a kívánt antibiotikum termelését nem csökkenti számottevő mértékben. Ilyen kationok pl. az ammonium, továbbá azok, amelyek alkálifémekből és alkáliföldfémekből (mint pl. nátrium, kálium, kalcium, magnézium) vagy aminokból, pl. 1—4 szénatomszámú primer, szekunder vagy tercier alkil-amino-csoportból vagy 1—4 szénatomszámú hidroxi-amino-alkil-csoportból képződnek. Előnyösen alkalmazhatók a nátrium-, kálium- vagy ammóniumionokat tartalmazó sók. A mikroorganizmusokra nézve nem toxikus savak — tehát azok a savak, melyek a fermentációs masszában alkalmazott koncentrációban sem a mikroorganizmus-tenyészet növekedését, sem pedig a kívánt antibiotikum termelését nem gátolják számottevő mértékben — előnyösen ásványi savak, mint pl. a sósav, de bizonyos esetekben szerves savak is lehetnek jelen. A fentiek szerint megfelelő prekurzorként használhatók az olyan, kis szénatomszámú mono- vagy polihidroxi-alkanolokkal képzett észterek, melyeket 1—6 szénatomszámú, molekulánként 1, 2, 3, 4, 5 vagy 6 hidroxicsoportct tartalmazó alkanolokkal állítunk elő. Ha 1—4 szénatomszámú alkanolokat használunk, 2 197771 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
